病毒的血球凝集及血球凝集抑制試驗

有些病毒，能凝集某種動(dòng)物的紅血球，故可以此來(lái)推測材料中有無(wú)該病毒的存在。

如有能凝集血球的病毒，其凝集性可為相應的抗體抑制，這種抑制具有特異性，故病毒的血球凝集抑制試驗，可用已知病毒來(lái)檢查被檢血清中的相應抗體，也可用已知血清來(lái)鑒定未知病毒。

由于只是一些病毒有血凝性，故血凝或血凝抑制試驗只能用于那些有血凝性的病毒。

現以新城疫病毒為例。

（一）需要材料

1．病毒  弱毒的雞新城疫疫苗，通過(guò)雞胚繁殖后所收獲的絨毛尿囊液。

2．已知陽(yáng)性血清  將弱毒苗初次免疫雞后，以后每周肌肉注射按規定稀釋好的疫苗1ml，四次。末次注射后2周，心臟采血，分出血清，血凝抑制價(jià)可超過(guò)1:1280，加硫柳汞后在冰箱中可保存5年以上。

3．被檢血清  從被檢雞的翅靜脈或心臟采血，分出血清。

4．雞血球  采雞血，抗凝，洗血球，配制成0.5％雞血球生理鹽水液。

（二）操作方法

1．微量紅血球凝集試驗（HA）

（1）用定量稀釋器于每排各孔中加PBS0.05ml。

（2）以稀釋器吸取1：5稀釋的抗原0.05ml于第一孔，反復擠壓3～5次后，吸0.05ml于第二孔，依次倍比稀釋至第11孔；棄去0.05ml。第十二孔不加抗原作為對照。

（3）再用帶新塑料吸嘴的稀釋器吸取0.5％紅血球懸液依次加各孔，每孔0.05ml。

（4）置微量振蕩器上振蕩1分鐘，或用手輕輕搖振，混勻。

（5）置室溫下（18～20℃）作用30～40分鐘。

依據血球凝集程度判定反應結果，以出現完全凝集的抗原最大稀釋度為該抗原的血球凝集效價(jià)。

2．微量紅血球凝集抑制試驗（HI）

能凝集紅血球的病毒，其凝集性可為相應的抗體所抑制，這種抑制具有特異性，稱(chēng)為紅血球凝集抑制試驗。病毒的血球凝集抑制試驗，可用已知的血清來(lái)鑒定未知病毒（即α－血球凝集抑制試驗），也可以用已知病毒來(lái)檢查被檢血清中的相應抗體（即β－血球凝集抑制試驗）。其中以β－微量法紅血球凝集抑制試驗最常用。

β－微量法HI試驗多在96孔微量反應板上進(jìn)行，具體操作(表20-2)為：

（1）用定量稀釋器取PBS0.05ml，加入每一排的第1孔，8個(gè)血凝單位濃度的抗原0.05ml于第2孔，再取濃度為4個(gè)血凝單位的抗原0.05ml依次加入第3～12孔。

（2）用定量稀釋器吸取待檢血清0.05ml于第1孔中，反復混勻后吸0.05ml于第2孔，依次倍比稀釋至第11孔，最后棄去0.05ml，第12孔不加血清，作抗原對照。

（3）置室溫下作用20分鐘。

（4）加0.05ml0.5％紅血球懸液于各孔中，輕輕振蕩混勻后，置室溫下30～40分鐘。

依據血球凝集抑制程度判斷結果。以完全抑制紅血球凝集的血清最大稀釋度為該血清的血球凝集抑制效價(jià)。如果以2為底的負對數（-log₂）表示，其血凝抑制效價(jià)恰好與反應板上出現完全抑制的最高孔數相一致。

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