病毒學(xué)實(shí)驗技術(shù)（4）

常用溶液的配制

（一）胰蛋白酶溶液  以漢克斯液配制，其濃度因胰蛋白酶牌號而定。一般說(shuō)來(lái)，Difco牌用0.27％，E·Merk牌用0.75％，新疆生化所產(chǎn)品用0.5％，其它牌號要經(jīng)試驗確定。按量將胰蛋白酶加入漢克斯氏液后，置37℃20分鐘使其完全溶解，濾器除菌（不能加溫，更不能高壓）無(wú)菌檢查合格后置-20℃保存，用前加適量的3.5％或1.4％ NaHCO₃使其pH為7.6～7.8。此液供消化細胞用。

（二）漢克斯（Hank’s）氏液，亦稱(chēng)亨克氏液；

原液甲一：

NaCl                     160g    

MgSO₄·7H₂O             2g

KC1                      8g      

MgC1₂·6H₂O              2g

按順序加入到800m1雙餾水中，一物溶解后再加另一物。

原液甲二： CaC1₂  2.8g溶于 l00 ml雙餾水中。

以上兩液混合，加雙餾水至1000 ml，加2ml氯仿防腐，保存于5℃。

原液乙一:

N aH₂PO₄·12H₂O          3.04g 

KH₂PO₄                   1.20g

葡萄糖                    20g

按順序加入到800ml雙蒸餾水中。

原液乙二：0.4％酚紅液100 ml（0.4％酚紅液是將0.4g酚紅置乳缽中，邊研磨邊徐徐滴加入0.1N的NaOH 11.28ml, 酚紅應完全溶解，置于100ml量杯中，最后加雙蒸餾水達100 ml）。

將酚紅液與葡萄糖等混合液混合，加雙蒸餾水至1000ml）加入2ml氯仿防腐，保存于5℃。

按下方配成漢克斯氏液，原液甲1份、原液乙1份、雙餾水18份，9磅10分鐘滅菌，此液在5℃下可保存1個(gè)月。

用前以1.4％ NaHCO₃（9磅10分鐘滅菌過(guò)），無(wú)菌操作，校正pH到7.4（根據需要而定），大約每20ml的漢克斯氏液加入0.5ml的碳酸氫鈉可達pH7.4，此時(shí)顏色應是黃紅色。

（三）厄爾（Earle）氏液

原液甲：

NaCl                        68g         

NaHCO₃                    22g

KCl                      4g          

葡萄糖                       10g

NaH₂PO₄·2H₂O             1.4g            

雙蒸餾水                     1000ml

原液乙：

CaCl₂                         2g         

MgCl₂·6H₂O                1.7g

雙蒸餾水                      500ml

使用時(shí)按下方配即成厄爾氏液：原液甲2份、原液乙1份、雙餾水17份，濾器過(guò)濾，無(wú)菌檢查合格后，保存5℃下備用。保存期1個(gè)月。

（四）供組織培養用的磷酸鹽緩沖鹽水（簡(jiǎn)稱(chēng)PBS）：

NaCl                          8g            

Na₂HPO₄                     1.15g

KC1                        0.2g         

KH₂PO₄                      0.2g

CaCl₂                          0.1g          

MgCl₂·6H₂O                 0.1g

雙蒸餾水                       1000ml

濾器過(guò)濾，此液pH為7.3，保存于5℃。當有沉淀發(fā)生時(shí)，不能供組織培養用。

下列供其它用途的磷酸鹽緩沖液，不能用于組織培養，注意區別。

（1） NaCl                     7.65g     

KH₂PO₄                     0.21g

Na₂HPO₄                    0.724g       

蒸餾水                    1000ml

此液PH為7.2。

（2） NaCl                     8.5g          

NaH₂PO₄·2H₂O              0.22g

Na₂HPO₄                    1.2g         

蒸餾水                    1000ml

（五）乙二胺四乙酸二鈉（簡(jiǎn)稱(chēng)EDTA，C₁₀H₁₄O₆N₂Na₂·2H₂O）溶液

乙二胺四乙酸二鈉         0.05g      

Na₂HPO₄                    0.288g

KH₂PO₄                     0.55g

NaCl                    2g      

KCl                         0.05g 

雙蒸餾水                250ml

9磅10分鐘滅菌，4℃下保存備用，可代替胰蛋白酶溶液來(lái)消化傳代細胞。

（六）5％乳蛋白水解物  將5g乳蛋白水解物加入雙餾水100ml，待其完全溶解后，裝瓶，9磅10分鐘滅菌，冷后置4℃保存。亦可用漢克斯氏液直接配成0.5％的溶液便于應用，但不宜長(cháng)時(shí)間保存。

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