病毒學(xué)實(shí)驗技術(shù)（1）

一、病毒診斷用病料的采集

病毒分離用生物學(xué)材料的最理想的采集時(shí)期，是在機體尚未產(chǎn)生抗體之前的疾病急性期。

各種病料，例如血液、鼻咽拭子、糞、尿、膿汁、水泡液、皮膚病變、脊髓液和活體穿刺材料以及剖檢時(shí)采取的組織，均可用于病毒分離。每個(gè)具體疾病需要采取什么樣的生物標本，可參考有關(guān)疾病的敘述，特別是其診斷部分。

有一些總的規則適用于病毒分離用的組織的正確選擇。呼吸道疾病在急性期，通常在鼻或咽分泌物排出病毒。在痘病的水泡液中或痂皮內也可發(fā)現病毒。許多全身性卡他性疾病具有病毒血癥期，易于由血液中分離到病毒。實(shí)際上急性發(fā)病期間，機體的所有分泌物中都含有病毒。與中樞神經(jīng)系統有關(guān)的疾病較特殊，但也可由血液或病死動(dòng)物的腦內分離病毒。采取組織標本時(shí)一個(gè)最為重要的注意事項，就是必須在動(dòng)物死亡后立即進(jìn)行——必要時(shí)可撲殺瀕死動(dòng)物，就更有利于病毒分離。同時(shí)應采取該動(dòng)物血液作血清學(xué)試驗,在冰凍前必須先從全血中分離血清，因為溶血標本經(jīng)常不再能做某些血清學(xué)試驗。

各種病毒的生物物理學(xué)和生物化學(xué)特性明顯不同。許多病毒對熱及酸敏感，故在采集材料時(shí)必須特別注意。尤其是必須采取新鮮材料，并立即置-60℃至-70℃下冰凍。此外，在用這些病料接種組織培養物或試驗動(dòng)物分離病毒時(shí)，時(shí)間盡量要短。如無(wú)其他方法，可將組織標本低溫冰凍后置-20℃保存，等待取來(lái)干冰后再貯藏和送往實(shí)驗室。將標本放入寬口保溫瓶或以泡沫苯乙烯隔熱的紙板盒內，再用冰充填，也可達到這一目的。如果沒(méi)有干冰，則可應用50％甘油；某些病毒在此種溶液中能比其他一些病毒存活更久。將小塊組織、糞或粘液裝入小瓶?jì)�，再向瓶�(jì)茸�滿(mǎn)50％甘油，并貯存于6℃。

組織標本應以無(wú)菌器械在無(wú)菌條件下采取。如果想要了解組織中的病毒分布，則必須應用分開(kāi)的器械采取每個(gè)組織。經(jīng)常應用緊蓋的滅菌旋帽瓶子貯存可疑的組織和液體。如將液體標本瓶放入干冰內，則應緊蓋瓶塞，因干冰的氣相就是CO₂，CO₂可因改變液體的pH值使不耐酸的病毒滅活。如果瓶蓋漏氣，則將其放入密封的塑料袋內也可達到目的。

二、包涵體的檢查

用狂犬病腦切片的內基氏（Negri）小體或其他包涵體標本片示教。若有狂犬病的病料組織，可用清潔的玻片作觸片，干燥后置甲醇中固定，以姬姆薩氏染液染1小時(shí)，水洗，干燥，鏡檢。

通�？捎萌�勒（Seller）氏染色法檢查狂犬病的包涵體。

（一）塞勒氏染液配制

1．先配好1％美蘭（即亞甲藍）的純甲醇溶液和1％堿性復紅（即堿性一品紅）的純甲醇溶液。兩液分別置瓶中加塞塞緊后，于冷處可長(cháng)期保存。

2．用前將兩份美蘭液與一份復紅液混合，即為塞勒氏染液。用前試驗，以神經(jīng)組織間質(zhì)染成淡紅色為妥，若紅色過(guò)淺酌加復紅液，紅色過(guò)深酌加美蘭液。

（二）塞勒氏染色法  將新鮮腦組織觸片（觸片不干也可以）浸于塞勒氏染液3秒鐘，取出，用普通水沖洗，自然干燥后鏡檢。

（三）結果  狂犬病包涵體在神經(jīng)組織的胞質(zhì)中，嗜酸性，呈櫻桃紅色。嗜堿性組織與細胞核呈深藍色，神經(jīng)細胞質(zhì)呈藍紫色，間質(zhì)呈粉紅色，神經(jīng)纖維呈桃紅色，神經(jīng)鞘不著(zhù)色。

上一篇：食源性病毒簡(jiǎn)介

下一篇：病毒學(xué)實(shí)驗技術(shù)（2）