布氏桿菌的平板凝集與試管凝集

 

（一）取潔凈玻片一塊，用玻璃鉛筆劃成五行小格，并標明待檢血清的號碼。

（三）按表8-1滴加待檢血清、抗原（將牛、羊、豬三型布氏桿菌懸浮于甘油濃鹽水中，加入煌綠及結晶紫制成）和生理鹽水（檢查綿羊、山羊血清時(shí)，用12％濃鹽水）。血清用前需放室溫，使其溫度達20℃左右。

 

表8-1  布氏桿菌的平板凝集反應

 

（三）用火柴棒自血清量最少格起,依次往前攪拌，使血清與抗原混勻，每份血清用一根火柴棒。

（四）混合完畢后，將玻片置于凝集反應箱上均勻加溫，或放于離火焰稍高處，微微加溫至30℃左右，3～5分鐘內記錄反應結果。

（五）按下列標準記錄反應強度

++++：出現大的凝集塊、液體完全透明。

+++：有明顯凝集塊、液體幾乎完全透明，即75%凝集。

++：有可見(jiàn)凝集片，液體不甚透明，即50％凝集。

+：液體混濁，有小的顆粒狀物，即25％凝集。

－：液體均勻混濁，無(wú)凝集物。

牛、馬和駱駝的血清在0.02ml處或以上凝集，而綿羊、山羊和豬的血清在0.04ml處或以上凝集，判為陽(yáng)性反應；牛、馬和駱駝的血清在0.04ml處凝集，綿羊、山羊和豬的血清在0.08ml處凝集時(shí)判為可疑反應。

大規模檢疫時(shí)，允許只用兩個(gè)血清量作試驗，牛、馬、駱駝?dòng)?.04和0.02ml，豬、山羊和綿羊、狗用0.08和0.04ml。如用兩個(gè)血清量作試驗，任何一個(gè)血清量出現凝集時(shí)，均需用四個(gè)血清量重檢。

（六）每次試驗須用標準陽(yáng)性血清和陰性血清作對照。

 

 

（一）每份血清用4支試管（1×8cm），另取對照管3支。如待檢血清多時(shí)，只設一份對照組。

（二）按表8-2，用0.5％石炭酸生理鹽水，將被檢血清稀釋成四個(gè)稀釋度。第五管中不加血清，設抗原對照。第六管中加1：25稀釋的布氏桿菌陽(yáng)性血清0.5毫升作陽(yáng)性對照。第七管中加1：25稀釋的布氏桿菌陰性血清0.5毫升作陰性對照。

（三）各管中加入用0.5％石炭酸生理鹽水稀釋20倍的布氏桿菌抗原0.5ml（每ml含菌8億）。

（四）各管加抗原后，將各管充分混勻，放37℃溫箱中感作4～10小時(shí)，取出后放室溫18～24小時(shí)，然后觀(guān)察并記錄結果。

（五）檢查豬、羊、狗時(shí)血清稀釋度為1:25，1:50，1:100，1:200；綿羊、山羊血清用10％濃鹽水稀釋。牛、馬和駝駱血清稀釋度為1:50，1:100，1:200，1:400，大規模檢疫可只用兩個(gè)稀釋度，即狗、豬、羊為1:25，1:50；牛、馬、駱駝為1:50和1:100。

判定結果時(shí)用“十”表示反應強度：

++++：液體完全透明，菌體完全被凝集呈傘狀沉于管底，振蕩時(shí)，沉淀物呈片狀、塊狀或顆粒狀（即100％的菌體被凝集）。

+++：液體略混濁，菌體大部分被凝集于管底，振蕩時(shí)呈片狀或顆粒狀（75％菌體被凝集）。

++：液體不透明，管底有明顯凝集片，振蕩時(shí)有塊狀或小片絮狀物（50％菌體被凝集）。

+： 液體不透明，僅管底有少許凝集，其余無(wú)顯著(zhù)的凝集塊（25％菌體被凝集）。

－：液體混濁，管底無(wú)凝集，菌體不被凝集，但由于菌體自然下沉，在管底中央可見(jiàn)圓點(diǎn)狀沉淀，振蕩后立即散開(kāi)呈均勻混濁。

（六）當每份待檢血清僅用2個(gè)稀釋度進(jìn)行試驗時(shí)，無(wú)論任何一個(gè)稀釋度發(fā)生凝集現象，該血清都應該用四個(gè)稀釋度重檢。

（七）判定血清凝集價(jià)：出現“++”以上凝集現象的最高血清稀釋度為凝集價(jià)。牛、馬和駱駝血清凝集價(jià)1:100以上為陽(yáng)性，1:50為可疑。豬、綿羊、山羊和狗的血清凝集價(jià)為1:50以上為陽(yáng)性，1:25可疑。