雅致放射毛霉5L發(fā)酵罐發(fā)酵實(shí)驗

 

一、實(shí)驗目的：掌握發(fā)酵罐的操作技能，學(xué)習微生物在發(fā)酵罐上發(fā)酵的過(guò)程和實(shí)驗方法。

二、儀器

分光光度計、電熱恒溫水浴鍋、生物發(fā)酵智能控制系統。

三、試劑

1、DNS試劑：取6.3g3,5-二硝基水楊酸（DNS）和262mL2mol/LNaOH溶液加到酒石酸鉀鈉的熱溶液中（192g酒石酸鉀鈉溶于500 mL水中），再加5g重蒸酚和5g亞硫酸鈉，攪拌使其溶解，冷卻后加水定容至1000mL，保存于棕色瓶中放置7天后使用。

2、10 g/L酪素溶液

3、種子培養基

4、產(chǎn)酶培養基

 

四、實(shí)驗方法

1、學(xué)習發(fā)酵罐的使用方法。

2、發(fā)酵罐中加入培養基，滅菌。

3、接種、培養。

4、測定酶活:

a. 先將酪素溶液放入（40±0.2）攝氏度恒溫水域中，預熱5 min；

b. 按下列程序操作：

試管A（空白）   （第二試管）            試管B（酶試樣，作三個(gè)平行樣）（第三試管）

     ↓                                                          ↓

加酶液2.00 mL       （移液管2ml）             加酶液2.00 mL

     ↓（40±0.2℃），2 min                             ↓（40±0.2℃），2 min

加三氯乙酸4.00 mL（搖勻）（移液管5ml）         加酪素2.00 mL（搖勻）

    ↓（40±0.2℃），10 min                            ↓（40±0.2℃），10 min      

加酪素2.00 mL（搖勻）（移液管2ml）         加三氯乙酸4.00 mL（搖勻）

↓                                                                  ↓

取出靜止10 min，過(guò)濾 （第四試管，小漏斗）  取出靜止10 min，過(guò)濾

↓                                                                  ↓

在275 nm波長(cháng)下，用 10 mm                   在275 nm波長(cháng)下，用 10 mm

比色皿測其吸光度                             比色皿測其吸光度

 

（5）計算（=135）

X=A×K×8/2×1/10×n×E=2/5×A×K×n×E

式中  X——樣品的酶活力（u/g）      A——試樣溶液的平均吸光度

K——吸光常數（K=135）       8——反應試劑的總體積（mL）

2——吸取酶液2.00 mL，以1 mL計    1/10——反應時(shí)間10 min，以1 min計

n——稀釋倍數                 E——紫外法與福林法的換算系數（取0.50）

 

五、實(shí)驗進(jìn)程安排及結果分析

   （1）第1次實(shí)驗：在實(shí)驗老師準備的已滅菌培養基和罐體的前提下，觀(guān)察罐上接種。同時(shí)熟悉罐的結構及每一部件用途。

   （2）第2次實(shí)驗：在下?lián)u瓶測定發(fā)酵液中蛋白酶活力的同時(shí)，每位同學(xué)在發(fā)酵罐上取樣，測定發(fā)酵液中蛋白酶活力。