工業(yè)微生物的篩選和紫外誘變育種

二、實(shí)驗原理：根據一定的生產(chǎn)目的如抗生素或酶類(lèi)的生產(chǎn)，建立不同的篩選模型，并從特定的樣品如土壤中篩選出高產(chǎn)適宜的菌株。

三．培養基及儀器：

降解亞硝酸鹽培養基：NaNO2 0.2%，KH2PO4 0.7%，MnSO4.H2O 0.25%，Na2HPO4 1.35%，MgSO4.7H2O 0.1%，葡萄糖1％，瓊脂2％，0.1MPa滅菌20分鐘。6個(gè)250ml三角瓶，各裝100ml培養基。

同時(shí)滅菌試管20支，1ml吸管12支，普通平皿60個(gè)，滅菌生理鹽水。培養亞硝酸鹽降解菌發(fā)酵液1瓶，每位同學(xué)準備1個(gè)斜面。

3．潔凈工作臺、培養箱、三角瓶、曲玻棒、平皿。

四．操作方法

課前半小時(shí)打開(kāi)超凈工作臺滅菌。

1.土壤中降解亞硝酸鹽細菌的篩選分離

稀釋土樣。5g土樣，加入45ml無(wú)菌水中。為10-1，然后取1ml加入9ml無(wú)菌水，為稀釋10-2，直至稀釋至10-8溶化培養基。

將溶化后不燙手的培養基倒入平皿，剛好蓋過(guò)平皿底部，迅速搖勻后放置，使培養基冷卻，要求平皿培養基表面平整、光滑。吸取10-4，10-5或10-6相應濃度的土樣稀釋液0.5ml，加入平皿內，用燒過(guò)滅菌的曲玻棒均勻涂平，放入37℃培養箱中倒置培養48小時(shí)。

2.亞硝酸鹽分解菌的紫外誘變育種

取10ml培養好的液體培養液，放入90 mm培養皿，將皿放置于誘變箱的磁力攪拌器上,置于30 W 紫外燈下，照射90 s，用無(wú)菌生理鹽水稀釋至10-6，10-7，10-8，按常規方法涂布篩選平板。

同學(xué)可自行選擇培養亞硝酸鹽降解菌和誘變菌。每位同學(xué)做一個(gè)平皿。并標記好稀釋度、種類(lèi)和名字。

五、實(shí)驗進(jìn)程安排及結果分析

（1）第1次實(shí)驗：稀釋土樣，倒平板，冷卻后進(jìn)行平板涂布，放入恒溫培養箱中；或進(jìn)行菌種誘變，稀釋誘變菌，倒平板，冷卻后進(jìn)行平板涂布，放入恒溫培養箱中。然后緊接著(zhù)進(jìn)行第二個(gè)實(shí)驗。

（2）第二次實(shí)驗：同學(xué)回到實(shí)驗室中，記錄實(shí)驗結果。培養24-48h后，記錄觀(guān)察到的菌落數量。并對其中2-5個(gè)不同菌落進(jìn)行形態(tài)描述。挑取其中1個(gè)菌落，接入斜面培養基進(jìn)行菌種保藏。

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