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      首頁(yè) > 微生物知識->中國藥典微生物檢測->微生物限度檢查驗證試驗

    微生物限度檢查驗證試驗



    錄入時(shí)間:2011-7-21 15:20:41 來(lái)源:互聯(lián)網(wǎng)

    試驗目的:進(jìn)行微生物驗證試驗
    背景知識(選填項目):
    原理(選填項目):
    實(shí)驗儀器:高壓蒸汽滅菌器、電子天平 、霉菌培養箱、電熱恒溫培養箱。
    主體內容(操作步驟,必填項目):
    1、菌液制備:參考中國藥典2005年版一部附錄微生物限度檢查法的菌液的制備方法,采用10倍稀釋法制備菌液。
    (1). 接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌的肉湯培養物致至營(yíng)養肉湯培養基中,置30~35℃培養18~24h,分別取上述培養物1ml加9ml0.9%的無(wú)菌氯化鈉溶液,10倍稀釋為10-4,細菌數約為50~100cfu/ml的菌懸液,做活菌計數備用。
    (2). 接種白色念珠菌的新鮮培養物至改良馬丁培養基中,經(jīng)25 ℃培養24~48小時(shí),取上述白色念珠菌霉菌液體培養物1ml加9ml0.9%的無(wú)菌氯化鈉溶液,10倍稀釋至10-5,細菌數約為50~100cfu/ml的菌懸液,做活菌計數備用。
    (3). 接種黑曲霉的新鮮培養物至改良馬丁瓊脂斜面培養基中,取經(jīng)25 ℃培養5~7天,加3~5ml0.9%的無(wú)菌氯化鈉溶液洗下霉菌孢子,吸取出菌液, 用標準比濁管進(jìn)行比濁后作為原液,然后取1ml加9ml0.9%的無(wú)菌氯化鈉溶液,逐管10倍稀釋為10-4,細菌數約為50~100cfu/ml的孢子懸液,做活菌計數備用。
    (沒(méi)有特殊要求的微生物限度檢查,只需要培養枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉菌5個(gè)菌種。如需檢沙門(mén)菌,則需要再培養乙型副傷寒沙門(mén)菌,如局部用栓劑等,菌種代數在5代以?xún)�。�?/DIV>
    2、供試菌液的制備:參考中國藥典2005年版一部附錄微生物限度檢查法的供試品液的制備方法,制備本品的供試品液。
    平皿法:(常規法)
    (1) 試驗組:①取10個(gè)平皿,2個(gè)一組分成5組,分別做好大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉的標記。
    ② 取1:10供試品溶液1ml,分別加入10個(gè)平皿中,再依次加入上述5種菌的菌懸液1ml(50~100cfu),每株菌平行制備2個(gè)皿,立刻傾注營(yíng)養瓊脂培養基和玫瑰紅鈉瓊脂培養基,分別置30~35℃培養48 小時(shí)和23~28℃培養72小時(shí)。
    (2)菌液組:分別取上述稀釋的菌液1ml注入平皿內,每個(gè)菌平行制備2個(gè)平皿,測定所加的試驗菌數。
    (3)供試品對照組:取1:10供試液1ml分別注入4個(gè)平皿中,立刻注入營(yíng)養瓊脂和玫瑰紅鈉瓊脂培養基,每種培養基制備2個(gè)平皿,分別置30~35℃培養48 小時(shí)和23~28℃培養72小時(shí),以測定供試品的本底菌數。
    3、細菌、霉菌、酵母菌的方法學(xué)驗證試驗結果記錄:
    4、控制菌驗證
    (1)菌液制備:參考中國藥典2005年版一部附錄微生物限度檢查法的菌液的制備方法,用10倍稀釋法制備菌液。
    (2)供試菌液的制備:參考中國藥典2005年版一部附錄微生物限度檢查法的供試品液的制備方法,制備本品的供試品液。
    (3)控制菌方法學(xué)考察結果表
     
    結論:本品按中國藥典2005年版一部微生物限度檢查,經(jīng)方法學(xué)驗證試驗,結果可用--- 法進(jìn)行控制菌檢驗。

     

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