真菌在其生長(cháng)發(fā)育過(guò)程中,表現出復雜多樣的形態(tài)特征。一般可將其分為維持生存的營(yíng)養體和傳宗接代的繁殖體兩類(lèi)。真菌營(yíng)養生長(cháng)階段的結構統稱(chēng)為真菌的營(yíng)養體。真菌的菌絲體在一定條件下可以形成多種特殊的變態(tài)結構,如吸器、附著(zhù)胞、附著(zhù)枝、假根、菌套和菌網(wǎng)等。菌絲體有時(shí)可以糾結在一起形成菌組織。菌組織可以形成菌核、子座和菌索等各種菌組織體。
真菌產(chǎn)生孢子的機構,無(wú)論是有性的還是無(wú)性的,統稱(chēng)為子實(shí)體。真菌的孢子分為無(wú)性孢子和有性孢子兩類(lèi)。無(wú)性孢子有游動(dòng)孢子、孢子囊孢子、分生孢子和厚垣孢子;有性孢子有休眠孢子(囊)、卵孢子、接合孢子、子囊孢子和擔孢子。真菌孢子的形態(tài)特征是鑒定和分類(lèi)學(xué)上重要的依據,其營(yíng)養體及其變態(tài)和菌組織體則是真菌分類(lèi)的重要參考依據,有的還是重要的鑒別特征和分類(lèi)依據。
一、目的要求
通過(guò)實(shí)驗了解真菌的一般形態(tài)特征,并初步掌握徒手切片、制片和繪制病原菌草圖技術(shù)。
二、儀器與用品
顯微鏡、幻燈機、投影儀、計算機及多媒體教學(xué)設備,滅菌培養皿、載玻片、蓋玻片、浮載劑(蒸餾水和乳酚油)、挑針、鑷子、雙面刀片、通草、擦鏡紙、無(wú)菌水等。
三、實(shí)驗材料
(一) 真菌營(yíng)養體實(shí)驗材料
(1)甘薯軟腐病菌(Rhizopus stolonifer)
(2)棉花立枯病菌(Rhizoctonia solani)
(3)尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum)
(4)大白菜霜霉病菌(Peronospora parasitica)
(5)炭疽菌(Colletotrichum sp.)
(6)油萊菌核病菌(Sclerotium sclerotiorum)
(7)水稻紋枯病菌(Rhizoctonia solani)
(8)麥角病菌(Claviceps purpurea)
(9)蘋(píng)果或甘薯紫紋羽病菌(Helicobasidium purpureum)
(10)稻曲病菌(Ustilaginoidea oryzae)
(二)真菌繁殖體實(shí)驗材料
(1)水霉菌(Saprolegnia sp.)
(2)腐霉菌(Pythium sp.)
(3)疫霉菌(Phytophthora sp.)
(4)根霉菌(Rhizopus sp.)
(5)毛霉菌(Mucor sp.)
(6)犁頭霉菌(Absidia sp.)
(7)玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)
(8)小麥白粉病菌(Oidium monilioides)(無(wú)性態(tài))
(9)大豆灰斑病菌(Cercospora )
(10)茄黃萎病菌(Verticillium )
(11)稻瘟病菌(Pyricularia oryzae)
(12)馬鈴薯早疫病菌(Alternaria solani)
(13)棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum)
(14)蕓薹根腫菌(Plasmodiophora brassicae)
(15)玉蜀黍節壺菌(Physoderma maydis)
(16)谷子白發(fā)病菌(Sclerospora graminicola)
(17)禾白粉病菌(Blumeria graminis)(有性態(tài))
(18)小麥赤霉病菌(Gibberella zeae)
(19)蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌(Valsa mali)
(20)麥角病菌(Claviceps purpurea)
(21)小麥腥黑穗病菌(Tilletia caries)
以上材料為實(shí)物標本或新鮮材料、掛圖、病原菌永久玻片多媒體教學(xué)課件(包括幻燈片、錄像帶、光盤(pán)等影像資料)等。
四、觀(guān)察內容和方法
(一)真菌的菌絲體及其變態(tài)和菌組織
1.無(wú)隔菌絲挑取培養皿中的甘薯軟腐病菌或瓜果腐霉的少許菌絲體,用蒸餾水或乳酚油作浮載劑,制臨時(shí)玻片鏡檢。觀(guān)察其菌絲形態(tài)特點(diǎn)。
提示:浮載劑放得太多容易使蓋玻片和觀(guān)察物飄浮移動(dòng),不易鏡檢。一般情況下,浮載劑只需加半滴即可。
2.有隔菌絲挑取培養皿中的鐮刀菌的少許菌絲體,用蒸餾水或乳酚油作浮載劑,制臨時(shí)玻片鏡檢。觀(guān)察其菌絲形態(tài)特點(diǎn)。
提示:對一些無(wú)色透明的病菌,顯微鏡下觀(guān)察時(shí),注意調節光源,光線(xiàn)不宜過(guò)強。挑取菌絲量盡量要少,并將其分散,以便觀(guān)察。
3.菌絲變態(tài)
(1)吸器。從幻燈片或照片觀(guān)察吸器形態(tài)。
(2)假根。取永久玻片,觀(guān)察孢囊;康募俑獗硐窀母鶢罹z。
(3)附著(zhù)胞。從幻燈片或照片觀(guān)察炭疽病的附著(zhù)胞形態(tài)。
4.菌組織體
(1)菌核。觀(guān)察油菜菌核病菌核的外形、顏色、大小,并鏡檢菌核切片,比較菌核外部組織和內部組織菌絲細胞的形狀、大小及排列情況。
(2)菌索。觀(guān)察幻燈片上的根狀菌索,是由菌組織形成的繩索狀結構,外形與高等植物的根相似。
(3)子座。切片觀(guān)察稻曲病的分生孢子座,觀(guān)察幻燈片上的麥角菌子座。
提示:切片時(shí)要注意切得要薄,觀(guān)察切片時(shí)往往看到的只是菌組織體整體結構的一部分,一定要注意從局部聯(lián)想其整體輪廓。
(二)真菌的繁殖體
1.無(wú)性孢子
(1)游動(dòng)孢子囊和游動(dòng)孢子。挑取水霉菌、綿霉菌或腐霉菌培養物,制作臨時(shí)切片,鏡檢游動(dòng)孢子囊和游動(dòng)孢子。
(2)孢子囊和孢囊孢子。挑取根霉菌培養物,制作臨時(shí)切片,鏡檢孢子囊和孢囊孢子。注意觀(guān)察孢子囊的結構、囊軸、孢囊梗、假根及匍匐絲和孢囊孢子形態(tài)特征。
(3)分生孢子。其色澤、形態(tài)變化較大,從無(wú)色至深色,單胞到多胞,并具多種形態(tài)。采用挑、刮或切片的方法,取玉米大斑病菌、小麥白粉病菌、馬鈴薯早疫病菌的病害標本,制作臨時(shí)切片,觀(guān)察分生孢子形態(tài)。注意觀(guān)察其分生孢子的顏色、分隔及其形狀。
(4)厚垣孢子。挑取鐮孢霉菌的培養物制片、鏡檢。菌絲中或孢子中個(gè)別細胞膨大、細胞壁加厚的孢子即厚垣孢子。
2.有性孢子
(1)休眠孢子囊。取甘藍根腫菌屬或玉米節壺菌切片,鏡檢觀(guān)察休眠孢子囊形態(tài)。
(2)卵孢子。取谷子白發(fā)病病穗,制作臨時(shí)切片,鏡檢卵孢子形態(tài)。
(3)接合孢子。取永久玻片觀(guān)察接合孢子形態(tài)。
(4)子囊孢子。從小麥赤霉病病穗上挑取子囊殼,制片鏡檢子囊殼、子囊及子囊孢子形態(tài)。
(5)擔孢子。觀(guān)察小麥腥黑穗病菌冬孢子萌發(fā)形成的擔子及擔孢子的形態(tài)
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