pfu及噬菌體滴度測定方法

 

pfu指的是噬菌體的空斑形成單位。以下是關(guān)于測定M13效價(jià)的一個(gè)方法：

測定噬菌體滴度

只有當噬菌體的感染復度MOI (multiplicity of infection)值遠低于1時(shí)（即細胞過(guò)量時(shí)），噬菌斑的數量才會(huì )隨著(zhù)加入噬菌體的量而呈線(xiàn)性增加。正因如此，建議檢測噬菌體貯液的滴度時(shí)，在感染前進(jìn)行稀釋?zhuān)�而不是在高M(jìn)OI值的情況下稀釋被感染的細胞。低MOI值有助于確保每個(gè)噬菌斑僅含一個(gè)DNA序列。

1. 接種ER2738單菌落于5-10 ml LB培養基中，搖床培養至對數中期（OD600 ~0.5）。

2. 細胞生長(cháng)時(shí)，微波爐融化上層瓊脂，分成3 ml等份于滅菌試管中，每個(gè)噬菌體稀釋度一管。保存于45℃備用。

3. 37℃預溫LB/IPTG/Xgal平板，每個(gè)噬菌體稀釋度取一個(gè)平板備用。

4. 在LB中準備10倍系列稀釋的噬菌體。建議稀釋范圍：擴增的噬菌體培養物上清：108-1011；未擴增的淘選洗脫物：101-104。每個(gè)稀釋度換一新鮮吸頭，建議使用帶濾芯吸頭以避免交叉污染。

5. 當菌體培養物達對數中期，分成200 μl等份于微量離心管中，每個(gè)噬菌體稀釋度一管。

6. 每管加入10 μl不同稀釋度的噬菌體，快速震蕩混勻，室溫溫育1-5 min。

7. 將感染細胞加入45℃預溫的上層瓊脂培養管中，每次一管，快速混勻，立即傾注于37℃預溫的LB/IPTG/Xgal平板上。適當傾斜平板將上層瓊脂均勻鋪開(kāi)。

8. 待平板冷卻5 min后，倒置于37℃培養過(guò)夜。

9. 檢查平板，計數有~102個(gè)噬菌斑的平板上的斑數。然后用此數目乘以稀釋因子即得到每10 μl噬菌體的空斑形成單位（pfu）滴度。