幽門(mén)螺旋桿菌（Hp）的特征、培養及診斷

 

幽門(mén)螺桿菌，Helicobacter pylori，簡(jiǎn)稱(chēng)Hp。首先由巴里·馬歇爾(Barry J. Marshall)和羅賓·沃倫(J. Robin Warren)二人發(fā)現，此二人因此獲得2005年的諾貝爾生理學(xué)或醫學(xué)獎。

 

幽門(mén)螺桿菌是一種單極、多鞭毛、末端鈍圓、螺旋形彎曲的細菌。長(cháng)2.5～4.0μm，寬0.5～1.0μm。革蘭染色陰性。有動(dòng)力。在胃粘膜上皮細胞表面常呈典型的螺旋狀或弧形。在固體培養基上生長(cháng)時(shí)，除典型的形態(tài)外，有時(shí)可出現桿狀或圓球狀。

 

電子顯微鏡下，菌體的一端可伸出2～6條帶鞘的鞭毛。在分裂時(shí)，兩端均可見(jiàn)鞭毛。鞭毛長(cháng)約為菌體1～1.5倍。粗約為30nm。鞭毛的頂端有時(shí)可見(jiàn)一球狀物，實(shí)為鞘的延伸物。每一鞭毛根部均可見(jiàn)一個(gè)圓球狀根基伸入菌體頂端細胞壁內側。在其內側尚有一電子密度降低區域。鞭毛在運動(dòng)中起推進(jìn)器作用，在定居過(guò)程中起拋錨作用。

 

幽門(mén)螺桿菌是微需氧菌，環(huán)境氧要求5～8%，在大氣或絕對厭氧環(huán)境下不能生長(cháng)。許多固體培養基可作幽門(mén)螺桿菌分離培養的基礎培養基，布氏瓊脂使用較多，但需加用適量全血或胎牛血清作為補充物方能生長(cháng)。常以萬(wàn)古霉素、TMP、兩性霉素B等組成抑菌劑防止雜菌生長(cháng)。

 

幽門(mén)螺桿菌對臨床微生物實(shí)驗中常用于鑒定腸道細菌的大多數經(jīng)典生化實(shí)驗不起反應。而氧化酶、觸酶、尿素酶、堿性磷酸酶、r－谷氨酰轉肽酶、亮氨酸肽酶這七種酶反應是作為幽門(mén)螺桿菌生化鑒定的依據。

 

幽門(mén)螺桿菌的全基因序列已經(jīng)測出，其中尿素酶基因有四個(gè)開(kāi)放性讀框，分別是UreA、 UreB、 UreC 和UreD。UreA和UreB編碼的多肽與尿素酶結構的兩個(gè)亞單位結構相當。幽門(mén)螺桿菌的尿素酶極為豐富，約含菌體蛋白的15%，活性相當于變形桿菌的 400倍。尿素酶催化尿素水解形成氨云保護細菌在高酸環(huán)境下生存。此外，尚有VacA基因和CagA基因，分別編碼空泡毒素和細胞毒素相關(guān)蛋白。

 

根據這兩種基因的表達情況，又將幽門(mén)螺桿菌菌株分成兩種主要類(lèi)型：Ⅰ型含有CagA和VacA基因并表達兩種蛋白，Ⅱ型不含CagA基因，不表達兩種蛋白，尚有一些為中間表達型，即表達其中一種毒力因子�，F在多認為Ⅰ型與胃疾病關(guān)系較為密切。

 

用于培養的胃粘膜活檢標本應置于生理鹽水、營(yíng)養肉湯或20％葡萄糖中，然后立即轉送到細菌室培養。如果標本不能在4個(gè)小時(shí)內培養，就應放在4攝氏度保存，但不宜超過(guò)24小時(shí)。長(cháng)期保存用于培養的活檢標本的唯一方法是將其置于－70攝氏度或液氮之中。

　

培養幽門(mén)螺桿菌的培養基包括非選擇性及選擇性?xún)煞N。常用的非選擇性培養基基礎為腦心浸液瓊脂、哥倫比亞瓊脂、胰蛋白胨大豆瓊脂以及Wilkins- Chalgren瓊脂。培養基中需加7％－10％的去纖維蛋白馬血。羊血、人血、馬血清、氯化血紅素、淀粉、膽固醇或環(huán)糊精 (cyclodextrins） 也可代替馬血。選擇培養基則是在上述 培養基中添加一定的抗菌藥物，如萬(wàn)古霉素、啶酸、二性霉素B、多粘菌素B以及甲氧芐氨嘧啶（TMP）。

 

常用的有Skirrow 配方及Dent 配方。前者原用于彎曲菌的培養，亦可用于幽門(mén)螺桿菌培養。后者為前者的改良，即將多粘菌素用頭孢磺啶取代，因為少數（5％左右）幽門(mén)螺桿菌菌株對多粘菌素敏感。Drnt配方為萬(wàn)古霉素（10mg／L）、頭孢磺啶（5mg／L）、TMP（5mg/L）以及二性霉素B（5mg／L）。有報道指出，部分菌株對啶酸敏感，因而培養基中應盡量避免作用該抗生素。