多管發(fā)酵法測定水中大腸菌群

 

一、目的要求 

1．學(xué)習測定水中大腸菌群數量的多管發(fā)酵法；

2．了解大腸菌群的數量在飲水中的重要性。

 

二、基本原理 

多管發(fā)酵法包括初（步）發(fā)酵試驗、平板分離和復發(fā)酵試驗。 

初（步）發(fā)酵試驗：利用大腸菌群能發(fā)酵乳糖而產(chǎn)酸產(chǎn)氣的原理，但初發(fā)酵管24h內產(chǎn)酸產(chǎn)氣和48h產(chǎn)酸產(chǎn)氣的均需進(jìn)行平板分離。

平板分離：采用伊紅美藍瓊脂平板，使大腸菌群產(chǎn)生帶核心的、有金屬光澤的深紫色菌落。 

復發(fā)酵試驗：以上陽(yáng)性菌落，經(jīng)染色為革蘭氏陰性無(wú)芽孢菌者，再次進(jìn)行初發(fā)酵試驗，經(jīng)24h培養產(chǎn)酸產(chǎn)氣的，最終確定為大腸菌群陽(yáng)性結果。

 

三、器材 

1、培養基：乳糖蛋白胨發(fā)酵管（內有倒置小套管），三倍濃縮乳糖蛋白胨發(fā)酵管（瓶）（內有倒置小套管），伊紅美藍瓊脂平板，滅菌水。

2、儀器或其他用具：載玻片，滅菌帶玻璃塞空瓶，滅菌吸管，滅菌試管等。

 

四、操作步驟 

1．水樣的采取

2．自來(lái)水檢查 

（1）初（步）發(fā)酵實(shí)驗 

將水樣分別接入三倍濃縮乳糖蛋白胨發(fā)酵管（瓶）中，37℃培養24h，24h未產(chǎn)氣的繼續培養48h。

（2）平板分離

將經(jīng)24h和48h培養后產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管（瓶），分別劃線(xiàn)接種于伊紅美藍瓊脂平板上，再于37℃培養18～24h，將符合下列特征的菌落進(jìn)行染色鏡檢。

深紫黑色，有金屬光澤； 

紫黑色，不帶或略帶金屬光澤； 

淡紫紅色，中心顏色較深。 

（3）復發(fā)酵試驗

將鏡檢為革蘭氏陰性無(wú)芽孢菌的菌株重復初步發(fā)酵試驗。并根據初發(fā)酵管試驗的陽(yáng)性管（瓶）查表1，即得大腸菌群數。

3．池水、河水或湖水等的檢查 

分別將100ml、10ml、1ml原水樣和經(jīng)稀釋成10－1、10－2的水樣重復上述自來(lái)水的檢查，其中100、10、1、10－1ml水樣的發(fā)酵結果查表2，10、1、10－1、10－2ml水樣的發(fā)酵結果查表3，即得大腸菌群數。

 

五、思考題 

1．大腸菌群的定義是什么？

2．假如水中有大量的致病菌——霍亂弧菌，用多管發(fā)酵技術(shù)檢查大腸菌群，能否得到陰性結果？為什么？

3．EMB培養基含有哪幾種主要成分？在檢查大腸菌群時(shí)，各起什么作用？

4．經(jīng)檢查，水樣是否合乎飲用標準？