單胞菌的人工感染與分離

 

熟悉單胞菌的形態(tài)特征及培養特點(diǎn)，魚(yú)類(lèi)病原菌分離鑒定的基本方法，鞏固單胞菌所致魚(yú)病的基本特性及癥狀。

 

單胞菌株純培養物普通瓊脂平板 鮮血瓊脂平板 普通肉湯 無(wú)菌蒸餾水 解剖刀 剪刀 鑷子 紗布 白瓷盤(pán) 潔凈的玻片 平皿 光學(xué)顯微鏡 一次性注射器 針頭 記號筆 酒精棉球 餌料 玻璃注射器水族箱 氣泵 控溫儀 吸管 洗耳球 滅菌試管 實(shí)驗用鯽魚(yú) 生理鹽水 溫度計 撈網(wǎng)

 

 

（ 1 ）普通肉湯培養基： 按以下劑量稱(chēng)取各種試劑（先稱(chēng)取鹽類(lèi)再稱(chēng)蛋白胨及牛肉膏），置于鋁鍋或搪瓷缸中。

牛肉膏 5g 磷酸氫二鉀 1g

蛋白胨 10g 蒸餾水 1000ml

氯化鈉 5g pH 7 . 4 ～ 7 . 6

 

初配好的培養基呈酸性故要用 NaOH 調整。將 pH 測定后的肉湯培養基用濾紙過(guò)濾，將過(guò)濾好的肉湯分裝試管、鹽水瓶、三角燒瓶等容器，待滅菌。

 

普通肉湯 1000ml

瓊脂 20g

 

瓊脂是由海藻中提取得一種多糖類(lèi)物質(zhì)，對病原性細菌無(wú)營(yíng)養作用，但在水中加溫可融化，冷卻后可凝固。在液體培養基中加入瓊脂 1 . 5 ～ 2 ％即可固定培養基，如加入 0 . 3 ～ 0 . 5 ％則成半固體培養基。

 

將稱(chēng)好的瓊脂加到普容肉湯中，加熱煮沸，待瓊脂完全融化后，將 pH 調至 7 . 4 ～ 7 . 6 。瓊脂融化過(guò)程中需不斷攪拌，并控制火力，不使培養基溢出或燒焦，并注意補充蒸發(fā)掉的水份。

 

加熱溶解好的培養基可用濾紙進(jìn)行過(guò)濾，固體培養基要用 4 層紗布趁熱過(guò)濾（切勿使培養基凝固在紗布上），之后按實(shí)驗要求，將配制好的培養基分裝入試管或三角瓶中，包扎好待滅菌，將培養基置于高壓蒸汽鍋內， 121 ℃ 滅菌 15 ～ 30min ，趁熱將試管口一端擱在玻棒上，使之有一定坡度，凝固后即成普通瓊脂斜面，也可直立，凝固后即成高層瓊脂。

 

鹽水瓶中的普通瓊脂已手掌感觸，若將瓶緊握手中覺(jué)得燙手，但仍能握持者，此即為傾倒平皿的合適溫度（ 50 ～ 60 ℃ ），每只滅菌培養皿倒入約 15 ～ 20ml ，將皿蓋蓋上，并將培養皿于桌面上輕輕回轉，使培養基平鋪于皿底，即成普通瓊脂平板。

 

培養基中的某種成分，如血清、糖類(lèi)、尿素、氨基酸等在高溫下易于分解、變性，故應過(guò)濾除菌，再按規定的量加入培養基中。