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    組織培養一般分為五個(gè)步驟:



    錄入時(shí)間:2011-7-11 14:56:05 來(lái)源:互聯(lián)網(wǎng)

    1)培養基的配制
    培養基的成份隨植物的種類(lèi)、外植體的類(lèi)型、培養階段的不同而不同。一般來(lái)說(shuō),培養基應含有大量元素、微量元素、鐵鹽、維生素、激素、糖和瓊脂等物質(zhì),有時(shí)還在培養基中添加有機附加物,如活性炭、椰子汁等。培養基的配制按如下步驟進(jìn)行:
    (1)根據培養材料確定培養基。一般可先試用MS培養基,若不適,再改用其它培養基。
    附:MS培養基——A組:(大量元素)(單位:mg·L-1,下同)
    NH4NO3 1650 ;KNO3 900 ;CaCl2 440 ;MgSO4·7H2O 370;KH2PO4 170
    B組:(微量元素)
    KI 0.83 ;H3BO3 6.2 ;MnSO4·H2O 22.3 ; ZnSO4·7H2O 10.6
    C組:
    Na2MoO4·2H2O 0.25 ;CuSO4·5H2O 0.025  ; CoCl2·6H2O 0.025
    D組:
    EDTA 37.3  ; FeSO4·7H2O 27.8
    E組:(有機物)
    甘氨酸(C2H5NO2) 2.0 ; 鹽酸硫胺素(VB6) 0.1 ; 煙酸 0.5
    吲哚乙酸(VB1) 1-30 ; 鹽酸吡哆醇 0.5 ; 6-芐基氨基腺嘌呤(6-BA) 0.04-10 ; IAA(吲哚乙酸) 0.01-3
    其他溶液的配制:1mol/L的NaOH溶液,0.1mg/mL的6-BA溶液,0.1mg/mL的IAA溶液,0.1mg/mL的2,4-D溶液,0.1mg/mL的KT溶液,0.1mg/Ml的ZT溶液。
    (2)按照確定的培養基配方配制培養基,一般包括溶化瓊脂、加入蔗糖和母液、調整酸堿度、定容、分裝等步驟。
    (3)對分裝好的培養基進(jìn)行高壓滅菌,將滅菌好的培養基放入接種室中。
    2)無(wú)菌培養物的建立
    (1)外植體的切取及消毒。用于快速繁殖的外植體可以是種子、莖尖、葉片、花序等。外植體必須先進(jìn)行消毒,其消毒方法是:從植株上切取所需的部分,用水沖洗干凈,而后移入超凈工作臺中用消毒劑(次氯酸鈉、氯化汞、酒精等)進(jìn)行消毒,但不管使用什么消毒劑,消毒后的外植體應該是無(wú)菌的,而其本身沒(méi)有被消毒劑殺死。
    (2)將消毒后的外植體接種到培養基中,接種時(shí)要求迅速準確,防止交叉污染。
    3)中間繁殖體的誘導和增殖
    消毒后的外植體在培養基上培養一段時(shí)間后可誘導出從芽、胚狀體、原球莖、根狀莖,這些培養材料稱(chēng)為中間繁殖體。對中間繁殖體進(jìn)行切割、繼代培養就可以進(jìn)行中間繁殖體的增殖。中間繁殖體的增殖速度隨花卉的種類(lèi)、培養基、培養條件的不同而異,因而對具體花卉需進(jìn)行試驗,找到合適的繁殖條件,以達到“快繁”的目的。
    4)生芽、壯苗與生根
    當中間繁殖體增殖到一定數量后快速繁殖進(jìn)入生芽、壯苗和生根階段。如果是通過(guò)從芽繁殖,則不需經(jīng)過(guò)生芽直接進(jìn)行壯苗、生根,如果是通過(guò)其它途徑則需先將中間繁殖體轉移到生芽培養基上,然后再轉移到壯苗生根培養基上。在壯苗生根培養基上,大多數花卉要分離成單苗。
    5)試管苗移栽和管理
    對已經(jīng)生根的試管苗及時(shí)移栽是花卉快繁的最后工作,而且也是十分關(guān)鍵的工作。由于試管苗是在無(wú)菌、有營(yíng)養供給、適合光照、溫度和100%相對濕度環(huán)境中生長(cháng)的,因而剛出瓶的試管苗對外面環(huán)境不太適應,稍一不慎便會(huì )造成大量死苗。所以對剛出瓶的試管苗要給予特別的照顧,適當的溫度、弱光照、高的空氣濕度、適宜的基質(zhì)及對病蟲(chóng)害的有效控制是提高成活率的關(guān)鍵。

     

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