臨床細菌形態(tài)檢查

細菌形態(tài)檢查

 

顯微鏡是觀(guān)察細菌形態(tài)的必備儀器。分為光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡。光學(xué)顯微鏡有普通光學(xué)顯微鏡、暗視野顯微鏡、相差顯微鏡、熒光顯微鏡等。

 

1.不染色可以觀(guān)察細菌的動(dòng)力及運動(dòng)等活體狀況，由于細菌的折光性不強，不能清楚的看到細菌的形態(tài)特征和結構。

 

標本的制作懸滴法、壓滴法和毛細管法，后者主要用于厭氧菌的動(dòng)力觀(guān)察。用普通光學(xué)顯微鏡、暗視野顯微鏡或位相差顯微鏡觀(guān)察。

 

2.染色標本的形態(tài)檢查

 

細菌的染色可能是由于毛細管現象和染料的滲透作用、染料的溶解和吸收作用使染料進(jìn)入細胞內，或由于電荷的吸附和結合使細菌著(zhù)色。也可能與細菌細胞內的化學(xué)成分有關(guān)。此外細菌的染色性與細菌細胞膜的通透性、細胞結構的完整性，以及培養基的種類(lèi)、菌齡，染色液的離子強度、pH，染色溫度等密切相關(guān)。

 

醫學(xué)檢驗中常用的染料：

 

酸性染料  細菌一般情況下都帶負電荷，故酸性染料一般不著(zhù)色。如剛果紅、伊紅等。

 

堿性染料  細菌一般情況下都帶負電荷，因此能與細菌結合，細菌學(xué)檢查中常用此類(lèi)染料。如美藍、結晶紫和堿性復紅等。

 

復合染料  如姬姆薩染料，是堿性和酸性染料的復合物。

 

單純染料  如蘇丹類(lèi)染料，溶于脂肪溶劑中，不溶于水，化學(xué)親和力低。

 

3.染色方法

 

應先制作細菌涂片。方法有單染色法和復合染色法。

 

（1）革蘭染色法  染液由革蘭結晶紫染液、革蘭碘液、95%酒精和稀釋石炭酸復紅（沙黃）組成。革蘭陽(yáng)性菌為紫色，革蘭陰性菌呈紅色。

 

影響因素：涂片過(guò)厚將使脫色不完全，酒精脫色時(shí)間過(guò)長(cháng)將導致過(guò)度脫色；染液儲存過(guò)久由于蒸發(fā)而影響濃度，特別是碘液久存或見(jiàn)光而形成碘酸，失去媒染作用；95%酒精如果密封不佳易揮發(fā)，失去脫色作用；細菌形態(tài)學(xué)檢查以對數生長(cháng)期的細菌形態(tài)最為典型，菌齡過(guò)長(cháng)易致陰性。

 

（2）抗酸染色法  染液由石炭酸復紅、3%鹽酸酒精和美藍組成�？顾峋�呈紅色，非抗酸菌和細胞呈藍色。

 

本法主要用于結核分枝桿菌和麻風(fēng)分枝桿菌的檢查，每張載玻片上只能涂1份標本，最好使用新玻片，否則必須徹底清洗干凈。染色使不得使用染色缸，吸水紙1片1張不得重復使用。脫色時(shí)間不得過(guò)短。為了防止實(shí)驗室感染可將標本先進(jìn)行高壓蒸氣滅菌，然后進(jìn)行抗酸染色。