土壤微生物接種技術(shù)

    1、初步掌握微生物的分離、培養和菌種的基本方法。
    2、練習微生物接種、移植和培養的基本技術(shù)，掌握無(wú)菌操作技術(shù)。

    土壤是微生物生活的大本營(yíng)，為了獲得某種微生物的純培養，一般是根據該微生物對營(yíng)養、酸堿度、氧等條件要求不同，而供給它適宜的培養條件，或加入某種抑制劑，淘汰其他一些不需要的微生物，再用各種方法分離、純化該微生物，直至得到純菌株。

    樣品：新鮮土壤。

    培養基：滅菌的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基、高氏一號培養基、馬鈴薯蔗糖培養基。

    無(wú)菌水：帶有玻璃珠裝有45mL無(wú)菌水三角瓶、裝有9mL無(wú)菌水的試管。

    其它：無(wú)菌培養皿、無(wú)菌吸管、無(wú)菌三角玻棒、電子天平、記號筆、接種環(huán)、酒精燈、火柴。

    試劑：1萬(wàn)U/mL鏈霉素液、10％苯酚

    接種方法：常用的有斜面接種法、平板接種法、液體接種法、試管深層固體培養基的穿刺接種法。

    接種工具：常用的有接種針、接種環(huán)、接種鉤、接種圈、接種鏟或接種鋤、玻璃涂棒等。

    （一）實(shí)驗程序1

 制備土壤稀釋液：(無(wú)菌操作過(guò)程見(jiàn)教師示范）

 1、稱(chēng)取土壤5g，放入45mL無(wú)菌水的三角瓶中，振蕩10min，即為稀釋10－1的土壤懸液。

    2、 另取裝有9mL無(wú)菌水試管5支，用記號筆編上10－2、10－3、10－4、10－5、10－6。取已稀釋成10－1的土壤液，振蕩后靜止0.5min，用無(wú)菌吸管吸取1mL土壤懸液加入10－2的無(wú)菌水的試管中，并在試管內輕輕吹吸數次，使之充分混勻，即成10－2土壤稀釋液。同法依次連續稀釋至10－4、10－5 、10－6土壤稀釋液。
    吸取稀釋液
    取一吸管，以無(wú)菌操作法分別吸取10－4、10－5、 10－6土壤稀釋液0.1mL，加在已制好的平板培養基上。

    涂板
    用玻璃刮鏟將稀釋液在培養機上充分混勻鋪平，倒置于恒溫箱培養。

    計算出每克土壤中細菌的數量。
    即用某一培養皿內真菌的菌落數乘以該培養皿接種液的稀釋倍數即得。

    挑取單個(gè)菌落，進(jìn)行劃線(xiàn)分離。

    （二）實(shí)驗程序2

    制平板

    吸取稀釋液
    取一吸管，以無(wú)菌操作法分別吸取10－4、10－5 、 10－6土壤稀釋液0.1mL，加在空培養皿中。

    混菌
    水平輕輕轉動(dòng)培養皿，使菌液、培養基充分混勻鋪平，放在平坦的桌面上，凝固后倒置于恒溫培養箱培養。

    計算出每克土壤中放線(xiàn)菌的數量。

    挑取單個(gè)菌落，進(jìn)行劃線(xiàn)分離。

    （三）實(shí)驗程序3

    制成平板。

    凝固后，用接種環(huán)取相應的菌液一環(huán)（10－1）在平板上劃線(xiàn)。
    1、連續劃線(xiàn)法：將挑取有樣品的接種環(huán)在平板培養基表面作連續劃線(xiàn)。完畢后，倒置于28～300C溫室培養。
    2、分區劃線(xiàn)法：用接種環(huán)以無(wú)菌操作挑取土壤稀釋液1環(huán)，先在培養基的一邊作第一次平行劃線(xiàn)3—4條，再轉動(dòng)培養皿約600C角，并將接種環(huán)上剩余物燒掉，待冷卻后通過(guò)第一次劃線(xiàn)部分作第二次劃線(xiàn)會(huì )，同法依次作第三次和第四次劃線(xiàn)。劃線(xiàn)完畢，蓋上皿蓋，倒置于溫室培養。

    挑取單個(gè)菌落接種于斜面培養基上，如果不純，再移植純化，最后得到純培養。

    1、根據實(shí)驗要求，在實(shí)驗時(shí)間內到實(shí)驗室進(jìn)行實(shí)驗時(shí)，一邊測量，一邊記錄實(shí)驗數據。報告要求準確、美觀(guān)。

    2、 在實(shí)驗中，如果發(fā)生實(shí)驗測量數據與事先的計算數值不符，甚至相差過(guò)大，此時(shí)應該找出原因，不能不了了之。同時(shí)要把通過(guò)實(shí)驗所測量的數據與計算值加以比較，如果誤差一般5％以下。

    3、在報告的最后要完成指導書(shū)上要求解答的思考題。

    1、平板培養時(shí)為什么要把培養皿倒置？

    2、在劃線(xiàn)分離時(shí)，為什么每次都需要將接種環(huán)上的剩余物燒掉？