結核桿菌毒力試驗及濃縮集菌

【材料】

1. 動(dòng)物：體重200~250克豚鼠2只

2. 結核桿菌培養物或結核病人檢驗材料（痰、尿、糞、腹水等材料經(jīng)濃縮集菌）

3. 注射器及消毒用材料等。

 

【方法】

1. 選取結核菌素試驗為陰性的豚鼠兩只。

2. 吸取結核桿菌懸液或病人檢材，注入豚鼠腹股溝皮下0.1ml

3. 注射后每周定期檢查一次，觀(guān)察豚鼠腹股溝淋巴結是否腫大，局部變硬，化膿及體重減輕、體溫升高等癥狀。

4. 給豚鼠作結核菌素試驗，是否出現陽(yáng)性結果。

5. 6周后，將豚鼠進(jìn)行解剖，觀(guān)察淋巴結是否腫大，有無(wú)干酪性病變，肝、脾、肺等是否腫大，表面有無(wú)灰白色結節病灶，取可疑病灶進(jìn)行涂片染色鏡檢和分離培養。若為陽(yáng)性結果，可報告“動(dòng)物接種后××天查到有結核菌感染”。如無(wú)癥狀及病變者，可報告為陰性。

 

材料：結核病人24小時(shí)痰液，細口瓶，0.02%酚紅液、汽油，NaOH，無(wú)菌生理鹽水等。

（一）漂浮法：

1. 取24小時(shí)痰液15毫升，裝入細口瓶?jì)�，加�?倍量0.5%NaOH搖勻，高壓滅菌或煮沸20—30分鐘殺菌。

2. 待冷后加入汽油2毫升（二甲苯也可以），用力振蕩20—30分鐘，用生理鹽水加至液面與瓶口齊，靜置半小時(shí)。

3. 取瓶口表面油狀物涂于載物玻片上，微微加熱，干后再加，如此重復5—6次，至厚度適宜，烘干待冷，抗酸染色，油鏡頭檢查。

(二)沉淀法：

1. 取痰液1份或2倍量4%NaOH，高壓無(wú)菌或煮沸20—30分鐘后，加入0.02%酚紅指示劑0.1毫升，劇烈振蕩混勻，亦可置37℃水浴消化30分鐘。

2. 矯正PH為7.0，3000轉/分離心30分鐘，棄去上清液。

3. 取沉淀物涂片染色鏡檢。若進(jìn)行分離培養和動(dòng)物接種，可免去高壓滅菌或煮沸的程序。

 

《附錄》

抗酸染液的配制

1. 石炭酸復紅液：稱(chēng)取鹼性復紅4克，溶于95%酒精100毫升中成飽和液。再取飽和液10毫升與5%石炭酸溶液90毫升混勻即成。

2. 3%鹽酸酒精：取濃鹽酸3毫升，95%酒 97毫升混合。

3. 呂弗勒氏鹼性美蘭液：稱(chēng)取美蘭2克，溶于95%酒精100毫升中，配成飽和液，取飽和液30毫升，再加入蒸餾水100毫升及10%氫氧化鉀水溶液0.1毫升即成。