管碟法測定抗生素效價(jià)

 

 

一、目的和要求 

 

1. 了解管碟法的原理。

 

2. 掌握二劑量法測定抗生素效價(jià)單位的技術(shù)和計算方法。

 

二、原理

 

抗生素的生物檢定是以抗生素對微生物的抗菌效力作為效價(jià)的衡量標準，具有與應用原理相一致、用量少和靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。管碟法是瓊脂擴散法中的一種，已被各國藥典廣泛采用，作為法定的抗生素生物檢定方法。

 

當抗生素在菌層培養基中擴散時(shí)，會(huì )形成抗生素濃度由高到低的自然梯度，即擴散中心濃度高而邊緣濃度低。因此，當抗生素濃度達到或高于MIC（最低抑制濃度）時(shí)，試驗菌就被抑制而不能繁殖，從而呈現透明的抑菌圈。根據擴散定律的推導，抗生素總量的對數值與抑菌圈直徑的平方成線(xiàn)性關(guān)系。

 

三、實(shí)驗材料

 

1. 四環(huán)素類(lèi)抗生素的標準品和樣品。

 

2. 試驗菌：藤黃八疊球菌（Sarcina lutea）。

 

3. 培養基：250ml三角瓶分裝150ml LB瓊脂，150ml三角瓶分裝50ml LB瓊脂，50ml三角瓶分裝20ml藤黃八疊球菌懸液用培養液。

 

4. 滅菌物品：培養皿，牛津杯（內徑：6.0±0.1mm，外徑：7.8±0.1mm，高度：10.0±0.1mm），滴管，1ml吸管，pH6.0的磷酸緩沖液，彎頭鑷子，15×150mm試管，瓦蓋。

 

5. 其它：分析天平，容量瓶，玻璃板，水平儀，游標卡尺。

 

四、實(shí)驗實(shí)施

 

1. 配制標準品溶液

 

2. 配制樣品溶液

 

3. 制備菌懸液。

 

4. 制備平板：

 

（1）取6套無(wú)菌培養皿，分別加入約20mlLB培養基后，置水平玻璃板上凝固，作為底層。

 

（2）另取冷卻至50℃左右的50ml LB培養基，加入1ml試驗菌懸液，迅速搖勻后，用10ml破口吸管取6ml混菌培養基倒在底層平板上，作為菌層，并放置在水平玻璃板上凝固。

 

5. 在培養基平板底部作好相應標記，用彎頭鑷子在每個(gè)培養皿中等距離放入4個(gè)牛津杯。

 

6. 用滴管分別將高、低濃度的標準品和樣品溶液加入到牛津杯中，以滴滿(mǎn)為度，換上皿蓋。

 

7. 將培養皿平穩送入恒溫箱，37℃下培養16～18h。

 

8. 用游標卡尺測量抑菌圈直徑