生孢梭菌計數

 

菌懸液的濃度要求的確是每毫升小于100cfu，但是最好在50到100cfu之間，小于50的話(huà)容易出現假陰性。

 

其實(shí)無(wú)菌方法驗證中的菌懸液的制備也是依中國藥典（2005年版二部）附錄XI H無(wú)菌檢查法中“培養基靈敏度檢查”項下的方法，制備成小于100 CFU/ml的對照用菌液。所以無(wú)論你做什么，菌懸液的制備方法都是一樣的。

 

具體方法就是，先把生孢梭菌在硫乙醇中培養24小時(shí)，然后吸取1毫升培養液用生理鹽水進(jìn)行10倍稀釋?zhuān)�我的�?jīng)驗是，稀釋到10的-7次方就是在100cfu以下了，然后取至少200ml的硫乙醇酸鹽培養基到試管里（要求無(wú)菌），然后接種1ml制備好的菌懸液到硫乙醇試管里，在32.5度下培養18h，然后開(kāi)始計數。生孢梭菌在液體的硫乙醇里會(huì )長(cháng)成梭子一樣的單個(gè)菌落，這時(shí)拿的時(shí)候千萬(wàn)不要震動(dòng)，然后開(kāi)始計數（一個(gè)單獨的“梭子”計一個(gè)菌落）。

 

注：如果培養時(shí)間太長(cháng)會(huì )產(chǎn)生渾濁，不便于計數。如果震動(dòng)試管也會(huì )渾濁。硫乙醇的量盡量大一點(diǎn)，這樣便于計數。