通常把細菌培養好后，離心，去除培養液，再加入生理鹽水重懸細菌。然后測分光光度計OD值，一般用固定的波值（我用波長(cháng)540nm）。比色杯（口徑1cm)內放入一定量的生理鹽水（3000ul)，同樣的比色杯對照調零。取上面細菌重懸液放入比色杯（3000ul)，測OD值，繼續加入細菌液直至測到0.1，記下所用的細菌懸液的總量（比如為100ul）。然后把細菌液連續進(jìn)行10倍稀釋?zhuān)總�(gè)稀釋倍數都取100ul輔瓊脂平板，培養20h后計數。
（1）計算細菌濃度
比如第6塊板（稀釋100000倍）的細菌數為100，推算原始菌液的濃度
100X10（只取0.1ml）X100000=100000000/ml
（2）計算OD值與細菌濃度之間的系數
[（3000+100）/100]X系數=100000000
系數=3225806.4（這個(gè)系數算出來(lái)后是固定的，以后每次都用這個(gè)數）
[（3000+100）/100]是比色杯中細菌被稀釋的倍數，而這個(gè)被稀釋的細菌測到的OD值剛好為0.1，那么以后每次你只要將細菌液測其OD值=0.1，計算其所需的菌液的量，即可算出所含的細菌濃度。不用每次都輔板培養。
舉例說(shuō)明：
在某一次你的菌液測其OD=0.1時(shí)，所需的量為150ul,
細菌濃度=[（3000+150）/150]X3225806.4=67741934 （CFU/ml）
這一方法，誤差不會(huì )太大�；旧鲜窃谝粋�(gè)數量級的范圍內。
有兩點(diǎn)要注意：
（1）測OD值要準（包括對儀器、比色杯的要求）
（2）如果細菌傳代培養較多次、或菌種保存時(shí)間長(cháng)了，系數每隔一段時(shí)間要重新測。否則不準。一般1月重輔板培養測一次系數。如果是第一次做，建議做兩次以求準確。
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