土壤中稀有放線(xiàn)菌的分離、純化和鑒別

 一、目的和要求

　　1、了解采集土樣的要求和方法。

　　2、掌握由土壤中分離稀有放線(xiàn)菌的基本原理和操作技術(shù)。

　　3、學(xué)習并掌握土壤稀釋法和微生物的純培養技術(shù)。

　　4、學(xué)習并掌握抗生菌的鑒別方法。

　　篩選放線(xiàn)菌是新抗研究的重要課題之一。迄今為止，已發(fā)現的抗生素有80%皆來(lái)自于放線(xiàn)菌。放線(xiàn)菌主要存在于土壤中，并在土壤中占有相當大的比例。一般地，放線(xiàn)菌在比較干燥、偏堿性、含有機質(zhì)豐富的土壤中數量居多。通常，隨著(zhù)地理分布、植被及土壤性質(zhì)的不同，放線(xiàn)菌的種類(lèi)、數量和拮抗性也各不相同。土壤是微生物的大本營(yíng)，其中的放線(xiàn)菌多以鏈霉菌為主，因此人們通常將除鏈霉菌以外的其它放線(xiàn)菌統稱(chēng)為稀有放線(xiàn)菌。若以常規方法進(jìn)行分離，得到的幾乎全部是鏈霉菌。然而，當采用加熱處理土樣、選用特殊培養基或添加某種抗生素等方法時(shí)，均可提高稀有放線(xiàn)菌的獲得率。由土壤中分離放線(xiàn)菌的方法很多，其中包括稀釋法、彈土法、混土法和噴土法等，本實(shí)驗主要采用稀釋法，并通過(guò)選用特殊培養基的方法，來(lái)獲得少量稀有放線(xiàn)菌。

　　由土壤中分出的放線(xiàn)菌需進(jìn)一步鑒別是否為需要的抗生菌。首先應根據篩選目的確定試驗模型，然后利用培養基平板進(jìn)行拮抗性測定。常用的方法有瓊脂塊法和濾紙片法。其主要依據是擴散原理，即觀(guān)察在抗生菌周?chē)�是否�?huì )出現明顯的抑菌圈。抑菌圈的大小和透明度則表明了該菌株抗菌活性的強弱。本實(shí)驗選用了這兩種方法。

　　1、培養基：葡萄糖天門(mén)冬素瓊脂，精氨酸瓊脂，高氏1號瓊脂，以上每種培養基皆用500ml三角瓶分裝250ml。

　　2、滅菌物品：牛皮紙袋，培養皿，1ml、5ml吸管，250ml三角瓶分裝90ml無(wú)菌水（含30粒玻璃珠），18×180mm試管分裝9ml無(wú)菌水，牙簽，玻璃刮鏟，18×180mm試管中分裝10 ml 1‰K2Cr2O7母液。

　　3、試驗菌：

　　　�。�1）枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）

　　　�。�2）大腸桿菌（Escherichia coli）

　　　�。�3）金黃色葡萄球菌（Staphlococcus aureus）

　　　�。�4）深紅酵母（Ruodotorula rubra）

　　4、其它：采土鏟，細目篩，藥勺，稱(chēng)量紙，試管架，小天平，記號筆，打孔器，游標卡尺、鑷子，圓濾紙片，15×150mm試管分裝5ml無(wú)菌水，1ml吸管，無(wú)菌漏斗。