沙門(mén)菌顯色培養基與普通培養基SS、HE的比對實(shí)驗

 

 

　[摘要]  目的  比對沙門(mén)菌顯色培養基與普通培養基在檢測腹瀉便時(shí)的敏感性差異。方法  將1000份腹瀉便標本增菌后接種沙門(mén)菌顯色培養基簡(jiǎn)稱(chēng)(CAS)和SS、HE沙門(mén)菌普通培養基做比對試驗。結果  沙門(mén)菌在CAS平板上呈現特定型的紅色菌落，非沙門(mén)菌呈現藍色或無(wú)色菌落。1000份腹瀉便標本中CAS陽(yáng)性檢出檢驗地帶網(wǎng)率為1.6%,高于SS陽(yáng)性檢出率1.5%和HE陽(yáng)性檢出率1.4%。結論  采用CAS選擇性平板分離沙門(mén)菌較易鑒別且直觀(guān)，同時(shí)也可以克服因肉眼挑選帶來(lái)的主觀(guān)誤差，本次試驗CAS沙門(mén)菌的檢出率優(yōu)于SS、HE普通選擇性培養基，適于腹瀉標本中沙門(mén)菌的檢測。

　　[關(guān)鍵詞]  沙門(mén)菌；沙門(mén)菌顯色培養基；沙門(mén)菌普通培養基

　　沙門(mén)菌是引起食物中毒和腸道腹瀉的病原菌之一。在食物中毒等突發(fā)公共衛生事件中，在我國內陸地區沙門(mén)菌占首位[1]。因此，尋找一種快速準確的鑒定沙門(mén)菌的試驗方法尤顯重要。沙門(mén)菌顯色培養基(CHROM Agar Salmonella, CAS)是一種新型培養基，由于添加了特異的顯色底物組合可以更精確的反映出樣品中含有的沙門(mén)菌[2]。為了了解其在實(shí)際工作中的優(yōu)勢特做如下比對試驗。

　　1  材料和方法

　　1.1  材料

   　1.1.1  樣本來(lái)源  選擇2008年7～9月(東北腹瀉流行季節)由吉林大學(xué)臨床二院、吉林市醫院腸道門(mén)診送檢的符合監測病例標準的腹瀉病人的糞便或肛拭標本共1000份。

　　1.1.2  培養基  亞硒酸鹽增菌液(SF)、沙門(mén)-志賀菌瓊脂(SS、HE)和腸道綜合雙糖管及其腸桿菌科鑒定編碼等培養基均購置北京陸橋生物技術(shù)公司；腸道菌生化鑒定卡API20E購置法國梅里埃公司；沙門(mén)菌顯色培養基CAS產(chǎn)自法國科瑪嘉，鄭州博賽生物技術(shù)研究所分裝；沙門(mén)菌診斷血清購置衛生部蘭州生物制品研究所。以上試劑均在有效期內使用。

　　1.2  方法

　　1.2.1  標本的檢測方法  肛拭樣品檢測按照GB／T17012-1997中相應操作規程進(jìn)行。

　  1.2.2  菌株的篩選和鑒定  在CAS和SS、HE分離平板上挑取相應的疑似菌落接種腸道雙糖鑒別生化管，經(jīng)初篩符合者(甘露醇＋、葡萄糖＋、尿素－、蔗糖－、動(dòng)力＋、電基質(zhì)-、硫化氫＋)做沙門(mén)菌檢驗地帶網(wǎng)血清玻片凝集試驗和系統生化鑒別試驗，如果生化符合、血清多價(jià)“O”、凝集的菌株再做單價(jià)凝集，按Kuffman white抗原表用“O”、“H”、因子血清或“H”位相誘導鑒定出完整抗原式，初篩排出的疑似菌株經(jīng)氧化酶試驗陰性后系統生化編碼鑒定到種。

 

　　1.2.3  菌株接種培養  將鑒定出的16株沙門(mén)菌和非16株沙門(mén)菌接種在CAS培養基和SS、HE培養基上，經(jīng)37℃24小時(shí)培養后觀(guān)察菌落顏色。

2  結果

2.1  菌落培養情況

16株沙門(mén)菌和16株非沙門(mén)菌在CAS培養基上的菌落顏色見(jiàn)表1。在CAS平板上，沙門(mén)菌落顯紫紅色、大腸桿菌、陰溝桿菌、枸櫞酸桿菌和宋內志賀氏菌菌落顯藍色，痢疾桿菌和變形桿菌顯無(wú)色或灰白色。

 

　　2.2  標本的檢測結果

 

　　1000份腹瀉便CAS檢出16株沙門(mén)菌檢出率為1.6%；SS檢出15株沙門(mén)菌檢出率為1.5%；HE檢出14株沙門(mén)菌檢出率為1.4%。三種培養基檢出結果類(lèi)似，CAS培養基與SS比較(x2=0.082，P＞0.05)無(wú)顯著(zhù)性差異；CAS培養基與HE比較(x2=0.13，P＞0.05)無(wú)顯著(zhù)性差異。

 

　　3  討論

 

　　在腸道門(mén)診中由于糞便采樣不規范、病人廣泛服用抗生素及培養基的特異性有限等因素影響，傳統分離方法的靈敏度有所降低。沙門(mén)菌在CSA顯色平板上菌落都表現為檢驗地帶網(wǎng)較易辨認的紫紅色，而其他非沙門(mén)菌呈現藍色或灰白色。說(shuō)明該顯色培養基對沙門(mén)菌有較高的特異性，易于辨認兩種或兩種以上混合的病原菌，可針對性的挑選沙門(mén)菌可疑菌落，避免因檢測可疑菌菌落數量少或檢測不夠熟練而導致漏檢的可能性。雖然CAS平板與SS、HE平板的檢測結果無(wú)統計學(xué)差異，但CAS平板的沙門(mén)菌檢出率高于SS、HE平板。

 

　　本次試驗SS和HE平板對沙門(mén)菌檢測的敏感性低于CAS平板的原因主要是標本中大量枸櫞酸桿菌和復雜的腸桿菌所表現出的假陽(yáng)性菌落的影響。由于沙門(mén)菌在CAS培養基上顯示紫紅色的菌落，那么在做食品檢樣時(shí)，就可以比較容易的區分沙門(mén)菌落和食物形成的類(lèi)菌落似的殘渣。

　　4  結論

 

綜上所述，SS、HE平板仍是國內實(shí)驗室普遍采用的沙門(mén)菌選擇性平板之一，CAS平板與SS、HE平板適用于沙門(mén)菌的分離。但沙門(mén)菌在CAS平板上有易于鑒別、選擇性好的特點(diǎn)，其優(yōu)勢還是遠遠大于普通培養基的選擇性。特別是在混有沙門(mén)菌的混合菌和突發(fā)公共衛生事件的處理中，首選CAS平板還是會(huì )取得較好的分離效果。

　作者:吉林省吉林市船營(yíng)區疾病預防控制中心 (張穎)  130000  吉林省吉林大學(xué)第二臨床醫院 (潘春枝)

　　參考文獻

　　[1]何曉青.衛生防疫細菌檢驗.北京:新華出版社,1989.

　　[2]Olivir G,Patrick DIC Patrick B,et aI.Comparison of CHROMagar salmonella midium and hektoen entnric agar for isolation of salmonellae from stool samples.J Clin Microbiol,1999,37:762-765.