布氏桿菌實(shí)驗診斷技術(shù)

 

《WHO實(shí)驗室生物安全手冊》將布氏桿菌列為Ⅲ類(lèi)危險級。布氏桿菌病是最容易實(shí)驗室感染的疾病之一，當處理培養物和嚴重感染樣品(如流產(chǎn)的材料)時(shí)要采取嚴格的安全預防措施。羊種布氏桿菌對人有高度致病性，是世界上最嚴重的人畜共患病之一。牛種布氏桿菌對人也具有高度致病性，實(shí)驗室操作活的培養物或動(dòng)物的污染材料是很危險的，必須在嚴格的生物安全三級或更高控制條件下進(jìn)行，盡量減少職業(yè)暴露。處理大量布氏桿菌建議使用不低于生物安全三級的控制條件。職業(yè)性接觸常致病，通�？�、呼吸系統、結膜是主要感染途徑，食人感染的奶制品構成主要的公共衛生危害。獸醫和農民經(jīng)常接觸感染動(dòng)物和流產(chǎn)胎兒或胎盤(pán)，存在很大的職業(yè)危險。

 

 

    1．樣品收集與培養

    以細菌培養診斷動(dòng)物布氏桿菌病時(shí)，樣品的選擇應以觀(guān)察到的臨床癥狀為依據。最有用的樣品包括流產(chǎn)的胎兒(胃內容物、脾、肺)、胎膜、陰道分泌物(陰道沖洗物)、奶、精液、關(guān)節炎和水囊瘤液。死后采集樣品的首選組織為網(wǎng)狀內皮組織(如頭、乳腺和生殖器淋巴結及脾)、懷孕后期或生產(chǎn)后早期的子宮、乳房。通常2-3天即可見(jiàn)有菌落生長(cháng)，如無(wú)細菌生長(cháng)也要培養8-10天才能認為是陰性而棄去。所有樣品采集后應冷藏并立即用最快的方式運送到實(shí)驗室。送到實(shí)驗室時(shí)，奶和組織樣品如不馬上分離應冷凍保存。

 

    2．培養特性

    布氏桿菌為需氧菌，對營(yíng)養要求嚴格，初代分離培養時(shí)，須在含肝湯、血清等營(yíng)養豐富的培養基上才能生長(cháng)。許多實(shí)驗室在基礎培養基(如血瓊脂基礎、哥倫比亞瓊脂)中加入血清以促進(jìn)某些布氏桿菌菌株的生長(cháng)，如加入2％～5％的牛血清或馬血清，則是牛種布氏桿菌2型生長(cháng)所必需的。其他合適的培養基還有血清葡萄糖瓊脂(SDA)、甘油葡萄糖瓊脂。該菌生長(cháng)緩慢，一般需要7一“天或更長(cháng)時(shí)間才能長(cháng)出肉眼可見(jiàn)的菌落。比較起來(lái)，羊種布氏桿菌生長(cháng)最慢，豬種布氏桿菌最快，牛種布氏桿菌介于兩者之間。多次傳代后，不但生長(cháng)變快(2-3天即可長(cháng)出菌落)，而且對營(yíng)養要求低，在普通培養基上也能生長(cháng)。在血清肝湯瓊脂上，形成濕潤、閃光、表面隆起、邊緣整齊的菌落。直徑1～2mm。透射光下，菌落呈淺黃色有光澤，半透明。從上面看，菌落微隆起，灰白色。隨時(shí)間推移，菌落變大，顏色變暗。光滑型(S)布氏桿菌在培養特別是繼代培樣時(shí)易發(fā)生變異而形成粗糙型(R)，菌落透明度降低、邊緣粗糙、表面干燥、在折射光下呈暗白或黃色。變異檢查操作簡(jiǎn)單，如用結晶紫染色，粗糙型菌落染成紅色；而光滑型菌落染成淺黃色。如果菌落是光滑型的，則應用光滑型牛種布氏桿菌抗血清或最好用A和M表面抗原特異單價(jià)抗血清進(jìn)行試驗。若為非光滑型菌落，分離物應用布氏桿菌R抗原的抗血清進(jìn)行測試。

 

    3．形態(tài)與染色

    該菌初次分離培養時(shí)多呈球桿狀，牛布氏桿菌、豬布氏桿菌經(jīng)傳代培養漸呈桿狀，羊布氏桿菌則不變。布氏桿菌多為長(cháng)0．6-1．5gm，寬0．5-0．7／zm的球桿菌或短桿菌。它們多單獨存在，很少成對或成團。布氏桿菌無(wú)鞭毛不運動(dòng)、無(wú)菌毛、無(wú)芽孢、不形成真正的莢膜。布氏桿菌革蘭染色陰性，一般不發(fā)生兩極著(zhù)染。用改良Ziehl-Neelsen方法染色，布氏桿菌菌體染成紅色，背景為藍色。

 

    4．生化特性

    該菌分解糖類(lèi)的能力因種類(lèi)而不同。一般能分解葡萄糖產(chǎn)生少量酸，不能分解甘露糖，不能產(chǎn)生靛基質(zhì)，不液化明膠，不凝固紫乳。VP試驗及MR試驗均陰性。有些菌型能分解尿素和產(chǎn)生H₂S。