臨床病原體檢查的常用方法（2）

㈡病毒感染檢查

 

     1、病毒的形態(tài)觀(guān)察：光學(xué)顯微鏡下只能觀(guān)察到大型病毒（如痘病病毒）和病毒感染后人體細胞胞質(zhì)或胞核內出現的包涵體，根據包涵體的特點(diǎn)，如巨細胞病毒感染后可在上皮細胞的核內周?chē)�繞有一輪暈似“貓頭鷹眼”樣的嗜酸性包涵體；電子顯微鏡可直接觀(guān)察到臨床標本或培養物中有特征性的病毒顆粒，如輪狀病毒、皰疹病毒、冠狀病毒等。

 

     2、病毒培養：由于病毒（virus）是專(zhuān)性細胞寄生，需要在活細胞或動(dòng)物體內才能分離培養，一般通過(guò)活組織培養、雞胚接種和動(dòng)物接種，最敏感而特異的方法為雞胚接種。根據培養過(guò)程或動(dòng)物接種后的變化特征、流行病學(xué)資料和標本來(lái)源可進(jìn)行初步鑒定，有助于確定病毒的種類(lèi)，但常需結合血清學(xué)試驗鑒定。病毒的分離培養與鑒定比細菌更為復雜，一般實(shí)驗室較少開(kāi)展。

 

 

 

     3、病毒抗原檢測：用免疫熒光或免疫酶等技術(shù)檢測標本中的特異性病毒抗原，如血清中的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）等。

 

 

     4、分子生物學(xué)診斷     ⑴病毒感染的診斷及療效觀(guān)察：檢測病毒核酸的序列或特異基因可確定存在病毒核酸，但是否為有感染性的病毒顆粒則有待進(jìn)一步確認。應用PCR和分子雜交技術(shù)可以直接擴增和分析DNA病毒的特異性片段；RNA病毒則應用逆轉錄-聚合酶鏈式反應（RT-PCR）技術(shù)，先逆轉錄為cDNA再行PCR擴增后檢測；定量PCR可對標本中的病毒進(jìn)行量化分析，對病毒感染的診斷和治療觀(guān)察有重要意義。例如，患者血清中檢測到乙型肝炎病毒DNA（HBV-DNA）是診斷HBV感染最重要的依據。HBV感染后在檢測到HBV表面抗原（HBsAg）的前2~4周即可查出HBV-DNA，故可診斷HBsAg陰性的HBV感染；通過(guò)定量PCR測定血清中HBV的載量（最低檢出量可達20拷貝/ml），可以觀(guān)察抗病毒療效；急性乙型肝炎時(shí)，HBV-DNA先陽(yáng)性，治愈后消失；慢性乙型肝炎時(shí)，HBV-DNA常持續存在，病毒載量或高或低。

 

 

     ⑵病毒的基因分型：不同病毒的DNA或RNA均有其特異的序列，同一種病毒的核苷酸組成具有一定的同源性，由此可以對病毒進(jìn)行基因分型。例如：戊型肝炎病毒（HEV）為一種RNA病毒，在全世界發(fā)現的病毒株有7個(gè)主要基因型，各型之間的核苷酸同源性為74%~76%。 

 

    ⑶流行病學(xué)調查：檢測感染病毒的基因型在不同國家或地區的分布特點(diǎn)，有助于分析流行毒株的變化特征。例如，不同地區的HEV基因變異較大，但同一地區的HEV基因序列則相對保守，這對HEV的診斷、研制疫苗、預防感染、臨床治療有重要價(jià)值。