血培養檢測規范化操作(3)

 

血培養檢測--陽(yáng)性結果的處理：

傳統手工法血培養應該每天至少檢查一次，對48h~72h未生長(cháng)的培養瓶至少應進(jìn)行需氧傳種培養一次。對培養瓶進(jìn)行肉眼檢查，注意下列幾點(diǎn)提示有微生物生長(cháng)：

1． 血與肉湯混合物出現渾濁。

2． 在血液層上有絮狀沉淀，某些鏈球菌在沉積的紅細胞表面上，會(huì )有小的“棉球樣”生長(cháng)。

3． 肉湯內出現渾濁生長(cháng)。

4． 肉湯表面有薄膜生長(cháng)。

5． 出現溶血。

6． 產(chǎn)生氣體，許多發(fā)酵菌可產(chǎn)氣，梭菌屬會(huì )產(chǎn)生大量的氣體，出現明顯的溶血現象。

7． 血液層表面或深層有白色顆粒。

8． 液體培養基凝固。

 

如果懷疑血培養陽(yáng)性，應立即進(jìn)行革蘭染色，以無(wú)菌手續從培養瓶中取肉湯2~3滴涂片，自然干燥，加熱固定并染色。染色結果應盡快報告，如革蘭陽(yáng)性球菌為成對或成堆或成鏈，革蘭陰性桿菌為小桿菌或球桿菌等。革蘭染色結果可指導醫生為患者經(jīng)驗選擇抗生素治療，并作為實(shí)驗室進(jìn)行細菌鑒定補充試驗的參考依據，它對于鑒別葡萄球菌和鏈球菌非常有用。如果血培養陽(yáng)性革蘭染色未發(fā)現細菌，應做吖啶橙染色進(jìn)行二次鏡檢，這對檢測彎曲菌菌血癥和布魯菌菌血癥很有幫助，而革蘭染色很少發(fā)現這些細菌。依據細菌革蘭染色形態(tài)特點(diǎn)，選擇適當的培養基傳種，見(jiàn)表1。

表1。 血培養陽(yáng)性后根據革蘭染色特點(diǎn)應傳種培養基種類(lèi)的建議

染色特點(diǎn) 5%~10%CO2孵育 　 厭氧氣體孵育ª

血瓊脂 巧克力瓊脂 中國蘭或麥康凱或EMB 血瓊脂 PEA或CAN

革蘭陽(yáng)性

球菌 × × ×

桿菌 × × ×

革蘭陰性

球菌 × × × ×

桿菌 × × × × ×

真菌b × ×

持續檢測陽(yáng)性 × × ×

革蘭染色陰性c

ａ所有培養至少至48h；EMB；伊紅美藍瓊脂；PEA；苯乙基醇瓊脂；CAN；多粘菌素-萘啶酮酸瓊脂。

ｂ增加真菌培養基（如：沙保弱葡萄糖瓊脂）和30℃培養。

ｃ接種硫羥乙酸鹽肉湯中。

當革蘭染色顯示細菌形態(tài)均一時(shí)，厭氧培養的價(jià)值不大。對所有培養陽(yáng)性，革蘭染色陰性的血培養瓶，再次上機檢測之前都應傳種厭氧和需氧培養皿。

革蘭染色為純的細菌，可進(jìn)行初步鑒定并做直接抗生素藥敏試驗的標準程序，而且沒(méi)有經(jīng)FDA批準的市售產(chǎn)品�？捎糜诔醪借b定的商品試劑，包括：膽汁溶解，DNA酶，乳膠凝集分型實(shí)驗等。

美國臨床實(shí)驗室標準化委員會(huì )（NCCLS）推薦的抗生素敏感試驗沒(méi)有血培養直接敏感試驗法。然而，許多學(xué)者提出：根據革蘭染色初步分析鑒定，可以靈活地選擇抗生素進(jìn)行直接抗生素藥敏試驗。

對各種血培養法中的陽(yáng)性肉湯培養物進(jìn)行傳種并且立即孵育培養，為進(jìn)一步試驗用，傳種5h-7h后有明顯的菌落生長(cháng)，取瓊脂表面的菌落用于細菌鑒定和抗生素敏感試驗。使用含固體培養基的血培養系統，如：雙相法，有菌落生長(cháng)可直接進(jìn)行細菌鑒定和標準的抗生素敏感試驗。

盡管現在使用探針雜交和DNA擴增技術(shù)可以鑒定血培養中的細菌和檢測抗生素敏感性，但這種技術(shù)不實(shí)用，價(jià)格昂貴，FDA不推薦常規使用。

血培養分離的細菌，萬(wàn)一需要進(jìn)一步的研究，至少保存幾個(gè)星期。為了讓細菌活著(zhù)，兼性需氧菌和兼性厭氧菌應傳種到半固體培養基中，例如動(dòng)力培養基。嚴格厭氧菌應保存到無(wú)葡萄糖的肉湯培養基或冷凍在兔血或脫脂牛奶培養基中�？吗B菌可以接種到巧克力瓊脂斜面上并用礦物油封存。為長(cháng)期儲存，細菌可懸浮于15%甘油肉湯中并-70℃冷凍。

 

血培養陽(yáng)性結果的報告程序：

血培養陽(yáng)性結果十分重要，應立即口頭報告給患者的主治醫生，報告的日期和時(shí)間以及接受報告人的姓名應記錄在患者的報告單上。應向臨床醫師提供重要的信息，包括革蘭染色的形態(tài)，血培養陽(yáng)性的數量和其他的鑒定資料，如革蘭陽(yáng)性球菌可疑為葡萄球菌。處理報告之前，應回顧一下患者近期標本的培養情況，這些結果有助于解釋感染微生物來(lái)源�？陬^報告后應立即進(jìn)行書(shū)面初步報告。除非初步報告有錯誤或新發(fā)現可改變患者的治療方案，否則不應更改初步報告的結果。

當培養24h和48h后，對陰性血培養結果在最短的時(shí)間內發(fā)出初步報告。有些實(shí)驗室以培養的時(shí)間長(cháng)短發(fā)初步報告，例如：“血培養3天后無(wú)細菌生長(cháng)”。

 

 

 

血培養檢測 真菌培養：

多種方法可提高血液中真菌的檢出率，包括使用通氣的真空血培養瓶、雙相培養基、裂解-離心技術(shù)和特殊營(yíng)養的肉湯培養基（如腦心侵液肉湯等）。裂解-離心技術(shù)是一種分離真菌的有效方法，特別是對于營(yíng)養要求可可的雙相真菌。實(shí)際上，大多數需氧的血培養瓶（通常孵育5至7天）可提供充足的營(yíng)養支持白色念珠菌的生長(cháng)。然而對于其他念珠菌屬、光滑球擬酵母菌、新型隱球菌、莢膜組織胞漿菌和其他雙相真菌，使用裂解-離心技術(shù)可獲得最高的檢出率。霉菌抑制瓊脂、腦心侵液瓊脂和巧克力瓊脂通常與lsolator管結合使用。對于分離糠秕鱗斑霉，可在培養基表面覆蓋一層橄欖油或其他長(cháng)鏈脂肪酸。陰性的真菌血培養應于22-30℃孵育4周后再仍棄.