銅綠假單胞菌及其鑒定

 

銅綠假單胞菌（P.aeruginosa）是假單胞菌屬的代表菌種，廣泛分布于自然界和人體，其在外界環(huán)境中存在的重要條件是潮濕環(huán)境；為條件致病菌，主要引起醫院內感染。

1．細菌特性

 

（1）形態(tài)染色 革蘭陰性桿菌，菌體呈球桿狀或長(cháng)絲狀，長(cháng)短不一；單個(gè)、呈雙或短鏈狀排列；無(wú)芽胞，有莢膜，一端有單鞭毛，運動(dòng)活潑，臨床分離株常有菌毛。

 

（2）培養特性 專(zhuān)性需氧菌，部分菌株能在兼性厭氧環(huán)境中生長(cháng)，營(yíng)養要求不高，在普通培養基上生長(cháng)良好，可生長(cháng)溫度范圍是25℃~42℃，最適生長(cháng)溫度35℃，4℃不生長(cháng)而42℃生長(cháng)是該菌的鑒別點(diǎn)之一。

 

在血平板、麥康凱平板上均可形成5種不同形態(tài)的菌落：①典型型，菌落呈灰綠色，大小不一，扁平濕潤，邊緣不規則，呈傘狀伸展，表面�？梢�(jiàn)金屬光澤；②大腸菌樣型，菌落圓形凸起，灰白色半透明，似大腸埃希菌菌落；③黏液型，菌落光滑凸起，呈黏液狀；④侏儒型，細小，無(wú)光澤半透明菌落；⑤粗糙型，菌落中央凸起，邊緣扁平，表面粗糙。在血平板上�？梢�(jiàn)透明溶血環(huán)，有生姜氣味；在液體培養基中呈混濁生長(cháng)，表面可形成菌膜，在SS瓊脂平板上，該菌經(jīng)過(guò)24h培養形成較小無(wú)色半透明菌落，一般不易與沙門(mén)菌和志賀菌菌落相區別，但經(jīng)48h培養菌落中央呈棕綠色。銅綠假單胞菌在普通瓊脂平板上生長(cháng)時(shí)，可產(chǎn)生多種色素，主要為綠膿素（為銅綠假單胞菌特征性色素）和青膿素（熒光素），前者為藍綠色。從臨床標本分離的銅綠假單胞菌約有80%~90%產(chǎn)生綠膿素和青膿素。

 

（3）生化反應 氧化酶陽(yáng)性，在OF培養基上，能氧化利用葡萄糖、木糖產(chǎn)酸，精氨酸雙水解酶陽(yáng)性，乙酰胺酶陽(yáng)性，液化明膠，利用枸櫞酸鹽，還原硝酸鹽并產(chǎn)生氮氣，吲哚陰性。

 

（4）抗原構造 銅綠假單胞菌有菌體（O）抗原、鞭毛（H）抗原、黏液（S）抗原和菌毛抗原。O抗原有兩種成分：一種是外膜蛋白，為保護性抗原，免疫性強，具有屬特異性；另一種為脂多糖（LPS），具有型特異性，可用于細菌分型。

 

（5）抵抗力 銅綠假單胞菌對外界因素的抵抗力比其他無(wú)芽胞菌強，在潮濕的環(huán)境中能長(cháng)期生存。對干燥、紫外線(xiàn)有抵抗力，但對熱抵抗力不強，臨床分離菌株對多種抗生素不敏感。

 

2．臨床意義

 

銅綠假單胞菌可從醫院內許多消毒不嚴的器皿和溶液中分離出來(lái)，常見(jiàn)為水溶液包括洗滌水、消毒液和液體藥物等。醫院內銅綠假單胞菌所致的肺部感染常見(jiàn)的入侵途徑是霧化吸入、氧氣吸入，各種侵襲性檢查和治療，如纖維支氣管鏡、導管、膽道、手術(shù)后引流等，破壞了機體皮膚或黏膜屏障，常引起本菌侵襲。

嚴重銅綠假單胞菌感染常發(fā)生在局部組織損傷或抵抗力降低的患者，如燒傷病人、各種癌腫患者和應用廣譜抗生素、激素、抗腫瘤藥及免疫抑制劑等患者；早產(chǎn)、先天畸形兒童和囊性纖維化等疾病及老年患者，也易發(fā)生嚴重的銅綠假單胞菌感染。

 

銅綠假單胞菌的致病作用與多種毒力因子有關(guān)，主要有以下幾種：

（1）黏附和定植 形成黏附的條件包括：①銅綠假單胞菌表面的莢膜多糖物質(zhì)阻止白細胞和吞噬細胞的吞噬作用；②細菌表面的黏附素（主要是菌毛）和上皮細胞上存在的相應受體結合；③宿主防御機制異常。后者使細菌得以駐足，并保持和上皮細胞長(cháng)時(shí)間的接觸。

 

完整的皮膚黏膜是天然的屏障，故銅綠假單胞菌很少成為健康人的原發(fā)病原菌，但改變或損傷宿主正常的防御機制，如皮膚黏膜破壞、留置導尿管、氣管切開(kāi)插管或免疫機制缺損如粒細胞缺乏、低蛋白血癥、各種腫瘤患者、應用激素和廣譜抗生素的患者，�？蓪е赂腥�。燒傷焦痂、嬰兒或兒童的皮膚、臍帶和腸道、老年人的尿道則是較常見(jiàn)的原發(fā)病灶或入侵門(mén)戶(hù)。如果人體抵抗力降低或細菌毒力強，數量多，就可在血中生長(cháng)繁殖，發(fā)生敗血癥。

 

（2）外毒素A 為主要毒力因子，是銅綠假單胞菌產(chǎn)生的最強有力毒素，可抑制蛋白質(zhì)合成，對皮膚黏膜有壞死作用，約90%菌株產(chǎn)生外毒素A，在燒傷病人，其致死作用特別突出。

 

（3）其他尚有蛋白酶、胞外酶S、溶血素、腸毒素、色素、殺白細胞素、內毒素等。

 

3．微生物學(xué)檢驗

 

（1）標本采集 按疾病和檢查目的分別采取不同的臨床標本，如傷口分泌物、尿液、膿及穿刺液、血液、腦脊液、胸腹水、關(guān)節液等。醫院環(huán)境檢測可從空氣、水、物體表面等處采樣。

 

（2）.檢驗方法

 

1）顯微鏡檢查 腦脊液、胸腹水離心后取沉淀物涂片，綠色膿汁、分泌物直接涂片革蘭染色鏡檢。為革蘭陰性桿菌，有鞭毛。

 

2）分離培養 血液和體液標本可先增菌后在轉種血瓊脂平板和麥康凱平板，膿液、分泌物、中段尿等可直接接種上述培養基。

 

3）鑒定與鑒別 根據培養物的菌落特征、產(chǎn)生水溶性綠色色素、特殊的生姜氣味、氧化酶試驗、OF試驗等即可作出初步鑒定。但對色素產(chǎn)生不典型的銅綠假單胞菌還需要做其它生化反應（如明膠液化、精氨酸雙水解試驗、42℃生長(cháng)試驗等，乙酰胺酶檢測試驗有一定的價(jià)值，）與其他假單胞菌鑒別。

 

 

從臨床標本中分離出銅綠假單胞菌，需要排除污染，從患者血及無(wú)菌體液、尿液中分離到本菌，特別是反復檢出者，結合臨床表現即可確定是感染病原菌，銅綠假單胞菌下呼吸道感染需連續三次痰培養陽(yáng)性才能確立，如患者無(wú)感染的臨床表現，雖然分離到銅綠假單胞菌亦應作為正常菌群。