微生物生長(cháng)的幾種檢測方法（4）

液體稀釋法：

 

　　對未知菌樣做連續十倍系列稀釋?zhuān)�根據估計數，從最適宜的三個(gè)連續的10倍稀釋液中各取5毫升試樣，接種1毫升到3組共15只裝培養液的試管中，經(jīng)培養后記錄每個(gè)稀釋度出現生長(cháng)的試管數，然后查最大或然數表MPN（most probably number）得出菌樣的含菌數，根據樣品稀釋倍數計算出活菌含量。該法常用于食品中微生物的檢測，例如飲用水和牛奶的微生物限量檢查。

 

　　平板菌落計數法：

 

　　這是一種最常用的活菌計數法。將待測菌液進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)�取一定體積的稀釋菌液與合適的固體培養基在凝固前均勻混合，或將菌液涂布于已凝固的固體培養基平板上。保溫培養后，用平板上出現的菌落數乘以菌液稀釋度，即可算出原菌液的含菌數。一般以直徑9cm的平板上出現50-500個(gè)菌落為宜。但方法比較麻煩，操作者需有熟練的技術(shù)。平板菌落計數法不僅可以得出菌液中活菌的含菌數，而且同時(shí)將菌液中的細菌進(jìn)行了一次分離培養，獲得了單克隆。

 

 

     試劑紙法：

 

　　在平板計數法的基礎上，發(fā)展了小型商品化產(chǎn)品以供快速計數用。形式有小型厚濾紙片，瓊脂片等。在濾紙和瓊脂片中吸有合適的培養基，其中加入活性指示劑2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC，無(wú)色）待蘸取測試菌液后置密封包裝袋中培養。短期培養后在濾紙上出現一定密度的玫瑰色微小菌落與標準紙色板上圖譜比較即可估算出樣品的含菌量。試劑紙法計數快捷準確，相比而言避免了平板計數法的人為操作誤差。

 

　　膜過(guò)濾法：

 

　　用特殊的濾膜過(guò)濾一定體積的含菌樣品，經(jīng)丫叮橙染色，在紫外顯微鏡下觀(guān)察細胞的熒光，活細胞會(huì )發(fā)橙色熒光，而死細胞則發(fā)綠色熒光。