傷寒、副傷寒沙門(mén)氏菌檢驗的標準操作程序

【目的】

    指導檢驗傷寒、副傷寒沙門(mén)氏菌。

【該SOP變動(dòng)程序】

    本標準操作程序的改動(dòng)，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準簽字：專(zhuān)業(yè)主管、科主任。

    由受檢者將采便用已蘸有甘油鹽水的棉棒自行插入肛門(mén)內，輕輕轉動(dòng)，然后取出，插入帶有編號的塑料試管中，交給檢驗科人員。

     采便→分離培養→挑選菌落接種三糖鐵斜面→生化試驗→血清學(xué)試驗→結果報告。

    1.      分離培養

    用棉棒直接劃線(xiàn)接種SS平板，36±1℃培養18-24小時(shí)，觀(guān)察菌落特征。傷寒及副傷寒沙門(mén)氏菌在SS平板上均呈無(wú)色半透明、光滑的中等菌落，菌落中心有黑心，但甲型副傷寒及部分傷寒沙門(mén)氏菌菌落無(wú)黑心。

平板上若有可疑菌落，挑選出來(lái)分別接種三糖鐵斜面。將接種可疑菌的三糖鐵斜面經(jīng)36±1℃培養18-24小時(shí)后，觀(guān)察反應情況。

    2.      生化學(xué)試驗

       凡是三糖鐵反應符合傷寒、副傷寒沙門(mén)氏菌特征者，作靛基質(zhì)試驗，尿素酶試驗，KCN試驗和賴(lài)氨酸脫酸酶試驗。符合者做血清學(xué)試驗。

傷寒、副傷寒沙門(mén)氏菌三糖鐵反應結果

 

    傷寒、副傷寒沙門(mén)氏菌生化反應結果

菌株	靛基質(zhì)	尿素酶	KCN	賴(lài)氨酸
傷寒	-	-	-	+
甲型副傷寒	-	-	-	-
乙型副傷寒	-	-	-	+
丙型副傷寒	-	-	-	+

 

    3.      血清學(xué)試驗

    ①    抗原準備

    取三糖鐵斜面培養物作為玻片凝集試驗用的抗原。

    ②    O抗原的鑒定

    按下列順序進(jìn)行：

 

A-F————→0-2————→0-4————→0-7————→0-9

多價(jià)血清     血清      血清    血清      血清

 ∣        ↓       ↓      ↓        ↓

-∣        A群     B群     C群      G群

 ↓                 -

Vi————→菌懸液———————→0—9——→0—7血清

血清  100℃水浴20分鐘        血清    +∣

                  +↓      ↓

               可能為傷寒菌  可能為丙型副傷寒

    ③    H抗原的鑒定

    根據O抗原出現的凝集情況，選用相應的H因子血清、檢查第1相與第2相H抗原，如果第2相抗原不凝集，可用位相變異試驗檢查。

    位相變異試驗方法可采用簡(jiǎn)易平板法：將0.5-0.7％半固體瓊脂平板烘干表面水份，取因子血清1環(huán)，滴在平板表面，待血清吸收到瓊脂內，便在血清部位的中央點(diǎn)種待檢菌株，培養后，在形成蔓延生長(cháng)的菌苔邊緣取菌檢查。

    傷寒、副傷寒沙門(mén)氏菌抗原構造

注：［ ］有的菌株有此抗原

    4.      菌型的判定和結果報告

    綜合以上生化學(xué)試驗和血清學(xué)分型鑒定的結果，判定菌型，報告結果。

        1      增菌及分離必須保證一個(gè)一支增菌管，一塊平板，禁止多人一管，多人一塊平板。

        2..      分離平板時(shí)平板一半以上應有孤立菌落，以供挑選。