布魯氏菌檢驗

 布魯氏菌檢驗
 Examination of Brucella

一、布魯氏菌與布魯氏菌病

布魯氏菌(Brucella)是人獸共患的布魯氏菌病病原體，牛、羊、豬等動(dòng)物最易感染。我國流行的主要是羊、牛(馬耳他)、豬三種布魯氏菌，其中以羊布魯氏菌病最為多見(jiàn)。

該細菌主要感染懷孕動(dòng)物，侵入生殖器官和網(wǎng)狀內皮系統，并感染胚胎和胎兒，多導致胎兒死亡并流產(chǎn)；公畜主要表現為睪丸炎。人患病主要是由畜傳染，人與人之間傳染機會(huì )極少，感染途徑主要是通過(guò)皮膚、消化道、呼吸道、眼結膜和生殖器官。人感染后潛伏期2～3周，由于本菌具有莢膜，能抵抗吞噬細胞的吞噬，并能在該細胞內增殖，反復出現菌血癥，病人出現發(fā)熱、無(wú)力等癥狀，且呈波浪式發(fā)熱，故在臨床上稱(chēng)為波浪熱。

        人類(lèi)接觸帶菌動(dòng)物或食用病畜及其乳制品，均可被感染。布魯氏菌病最危險之點(diǎn)是患畜幾乎不表現癥狀，但能通過(guò)分泌物和排泄物(乳、精子、陰道分泌物、糞、尿)不斷向外排菌，待別是隨流產(chǎn)胎兒、胎衣和羊水排出大量病原菌，成為最危險的傳染源。本菌在自然界中抵抗力較強，在病畜臟器和分泌物中，一般能存活4個(gè)月左右，在食品中約能生存2個(gè)月。在水、土、糞、尿中存活3個(gè)月，在皮毛上存活1～4個(gè)月，在凍肉中存活2～7周，在乳中存活10天至1年。對低溫的抵抗力也強，對熱和消毒劑抵抗力弱。對鏈霉素、氯霉素和四環(huán)素等均敏感。

nBrucella  is named after Sir David Bruce who, in 1886, first isolated the organism from the spleen of a soldier at post-mortem (尸檢)with what was then called Malta fever.

nThe genus Brucella  currently contains six species : B. melitensis, B. abortus, B. canis, B. ovis, B. suis and B. neotomae, which vary in their ability to infect host animals.

nB. abortus primarily infects cattle but is transmitted to buffaloes, camels, deer, dogs, horses, sheep and man.

nB. melitensis causes a highly contagious disease in sheep and goats although cattle can be infected. It is the most important species in human infection.

nsix species of Brucella：

nB. suis covers a wider host range than most other Brucella  species.This species has 5 biovars. All biovars can be transmitted to man  with the possible exception of biovar 2.

nB. canis causes epididymo-orchitis in the male dog and abortion and metritis in the bitch. It has not been reported in other animal species except man.

nB. ovis is responsible for epididymitis in rams and occasionally abortion in ewes, but does not infect other animals or man.

nB. neotomae is only known to infect the desert wood rat (沙林鼠)under natural conditions, and no other cases have been reported.

圖：Brucellosis, Hygromas(水囊瘤) on the knee joints. This condition may be a sequel to Brucella abortus infection.布魯氏菌病引起的流產(chǎn)

 

二、生物學(xué)特性

(一)形態(tài)染色特性

     布魯氏菌初分離時(shí)為微小球桿菌，繼代后，牛和豬布魯氏菌可逐漸變?yōu)闂U狀，羊布魯氏菌仍為小球桿狀。平均大小為0.6～1.5μm ×0.5～0.7μm。革蘭氏染色陰性。不形成芽孢，無(wú)鞭毛，無(wú)動(dòng)力。常單個(gè)存在。光滑型菌有莢膜�？杀凰�有堿性染料著(zhù)色，不呈兩極濃染�？率先旧�法(沙黃與孔雀綠對染)染色，本菌為鮮紅色，其它雜菌被染成綠色。

 (二)培養特性

n專(zhuān)性需氧，但許多菌株初次分離時(shí)需5% ～10%的CO2環(huán)境。適宜溫度為35～38℃，適宜pH為6.6～7.4。布魯氏菌的培養特點(diǎn)是生長(cháng)緩慢，尤其是新分離株初次分離時(shí)在48h前罕見(jiàn)菌落形成，往往需要5～10d甚至20～30d。傳代適應后48h可見(jiàn)生長(cháng)。

n對營(yíng)養要求嚴格，需某些氨基酸、血清、血液或組織浸液。血清葡萄糖肉湯和血清葡萄糖瓊脂可支持所有種和大多數菌株生長(cháng)。在肉肝湯中一般需2～3d才可見(jiàn)生長(cháng)。肉湯輕微渾濁，無(wú)菌膜。1周后產(chǎn)生灰白色粘稠沉淀物。老齡培養物中有時(shí)可見(jiàn)菌環(huán)。

n在血清肝湯瓊脂上2～3d 后形成濕潤、閃光、無(wú)色、圓形、表面隆起、邊緣整齊的小菌落。在血液肝湯瓊脂上菌落灰白，不溶血。在高層血清瓊脂培養3～6d后，牛型及綿羊型于瓊脂表面0.5cm處呈帶狀生長(cháng)。而在馬鈴薯斜面上本菌生長(cháng)良好，2～3d后長(cháng)出微棕黃色菌苔，色素溶于基質(zhì)。

 (三)生化特性

多數菌株可分解葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖等，但分解能力低，產(chǎn)酸少，很難檢測。本菌不液化明膠；不產(chǎn)生靛基質(zhì)；不凝固牛乳；能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽；接觸酶陽(yáng)性；MR試驗和V-P試驗陰性；H₂S試驗不定。

(四)血清學(xué)特性

•本菌抗原結構非常復雜，就目前所知，布魯氏菌有表面抗原(A、M、R)、亞表面抗原和深部抗原3類(lèi)。

n1. A、M抗原   光滑型菌株的表面抗原主要是A(流產(chǎn)型)和M(馬耳他型)抗原，為細胞壁脂多糖的大分子復合物，既是這些細菌的凝集原，也是種和型鑒定的重要依據。流產(chǎn)布魯氏菌A﹕M為20﹕1，馬耳他布魯氏菌為1﹕20，豬布魯氏菌為4﹕1。

n2. R抗原   非光滑型菌株除A、M抗原外，均還具有R抗原，為細胞壁上低蛋白含量的脂多糖復合物。絕大多數非光滑型菌株的R抗原是相同的，其抗血清可與羊布魯氏菌和犬布魯氏菌發(fā)生凝集，而不與光滑型布魯氏菌凝集。

 

三、檢驗

一) 檢驗程序     見(jiàn)《動(dòng)物性食品檢驗學(xué)》第六章。

二) 細菌的分離培養與鑒定   首先要注意安全，防止人員感染和環(huán)境污染，其次要特別注意滿(mǎn)足布魯氏菌的營(yíng)養要求。

1. 細菌的分離培養：SDA(血清葡萄糖瓊脂)，對污染樣品則接種在選擇培養基(加有抗生素的SDA)上。也可將檢樣接種于含2%(W/V)檸檬酸鈉和抗生素的SDB中，經(jīng)37℃培養2～3d(必要時(shí)補充5～10%的CO2)后再于SDA上分離培養約6d，直到出現可見(jiàn)菌落。

2. 布魯氏菌的鑒定分型：在必要時(shí)進(jìn)行布魯氏菌的鑒定分型。   常規方法有： CO₂需求的檢查，H₂S產(chǎn)生量的測定，染料抑菌試驗， A、M、R血清凝集試驗， Tb噬菌體裂解試驗。

 

三) 血清學(xué)檢驗

用血清學(xué)試驗診斷人、畜布魯氏菌病仍是當前主要手段。常用的方法有10多種，其中用于人布病診斷的主要有試管凝集試驗、二巰基乙醇試管凝集試驗、抗球蛋白試驗和補體結合反應，用于動(dòng)物診斷的主要方法是試管凝集試驗、平板凝集試驗、虎紅平板凝集試驗和瓊脂擴散試驗等。

n(1)平板凝集試驗(Plate agglutination test, PAT)

n(2)虎紅平板凝集試驗(RBPT)

n(3)試管凝集試驗(SAT)：

n(4)抗人免疫球蛋白試驗(Coomb’s反應)

n(5)補體結合試驗(Compliment fixation test, CFT)