禽流感病毒檢驗

禽流感病毒

     (Avian influenza virus，AIV)

自1878年P(guān)erroncito首次報道意大利雞群暴發(fā)禽流感至今的一百多年歷史中，禽流感呈廣泛性傳播和全球性分布，世界范圍內許多國家和地區均有禽流感暴發(fā)和流行的報道，給養禽業(yè)造成了很大的經(jīng)濟損失。更為可怕的是由高致病性禽流感病毒(HPAIV)引起的疫病暴發(fā)在上世紀九十年代之前共有9次發(fā)生，21世紀初的近幾年又連續爆發(fā)，對世界范圍內養雞業(yè)及人類(lèi)健康造成極大危害。禽流感：具有爆發(fā)突然、蔓延迅速、波及面廣等特點(diǎn)，人類(lèi)、豬、家禽、野禽、水禽等均是受害對象。

人流感：我國每年流感病例數為1.2億至2.4億例，重癥流感病例為60萬(wàn)至100萬(wàn)例，死亡為5萬(wàn)至10萬(wàn)人，因流感而導致的經(jīng)濟損失十分驚人。

 

一、生物學(xué)特性

正粘病毒科/甲型流感病毒屬。病毒粒子一般為球形，直徑為80～120nm，但也常有同樣直徑的絲狀形式，長(cháng)短不一；外有囊膜，囊膜表面有許多放射狀排列的纖突(Spikes)，纖突分兩類(lèi)，一類(lèi)是棒狀，由血凝素(HA)分子的三聚體構成；另一類(lèi)是蘑菇狀，由神經(jīng)氨酸酶(NA)分子的四聚體構成，兩種結構在囊膜上的比例約為HA：NA＝75：20。

透射電鏡下呈圓形，其表面有纖突(×60 000)。 核酸型為單股負股RNA，分8節； 8個(gè)獨立的RNA片段，分別編碼PB1，PB2，PA，HA，NP，NA，M1，M2，NS1，NS2等10種蛋白。

培養特性：易在雞胚以及雞和猴的腎組織培養中生長(cháng)；有些毒株也能在家兔、公牛和人的細胞中生長(cháng)；在組織培養中能引起血球吸附，并常產(chǎn)生病變；大多數毒株能在雞胚成纖維細胞培養中產(chǎn)生蝕斑；有些毒株在雞、鴿或人的細胞培養中培養之后，對雞的毒力減弱。

抵抗力：禽流感病毒對外界因素的抵抗力較弱,56℃ 30min、60℃ 10min、65-70℃ 數min即可滅活病毒。但對低溫抵抗力較強，4℃可存活1個(gè)多月，在有甘油保護的情況下可保持活力1年以上流感病毒在直射陽(yáng)光下40至48小時(shí)即可失去活性。

 

二、抗原性

一)根據流感病毒的核蛋白(NP)和膜蛋白(MS)抗原性的不同，將其分為A、B、C三個(gè)血清型，三型之間的差異可通過(guò)瓊脂擴散試驗或補體結合試驗等進(jìn)行測定。

二)HA和NA是病毒表面的主要糖蛋白；具有種(亞型)的特異性和多變性，在病毒感染過(guò)程中起著(zhù)重要作用;HA決定病毒的致病性，能誘發(fā)感染宿主產(chǎn)生具有保護作用的中和抗體，NA誘發(fā)的抗體無(wú)中和作用,但可減少病毒增殖和改變病程。

 

迄今已知有16種HA和10種NA，根據病毒HA和NA抗原性的差異，又可將其分為不同的亞型。據報道現已發(fā)現的流感病毒亞型至少有80多種；其中絕大多數屬非致病性或低致病性；高致病性亞型主要是含H5和H7的毒株�；�因組極易發(fā)生變異：HA的基因的突變率最高，其次為NA基因。

AIV基因組極易發(fā)生變異

1、流感病毒基因突變，導致流感病毒發(fā)生抗原漂移(antigenic drift) ，因為流感病毒的RNA復制酶缺乏校正閱讀能力，導致不同毒力毒株出現。如1983-1984(美國)H5N2，6個(gè)月后成為高致病性，禽類(lèi)病死率為90%；1999-2001(意大利)H7N1，9個(gè)月后成為高致病性。

2、基因重組是流感病毒發(fā)生抗原轉變(antigenic shift)的主要原因。目前，多數人認為抗原轉變是以前流行于人和動(dòng)物流感病毒基因片段重組的結果。(鴨-豬-人-禽)(新亞型出現)

 

三、致病性

引起各種類(lèi)型的禽流感( Avian influenza ，AI)。高致病性禽流感(Highly pathogenic avian influenza, HPAI)又稱(chēng)：真性雞瘟、歐洲雞瘟。OIE A類(lèi)傳染病，嚴重危害養禽業(yè)。

禽流感的分類(lèi)：高致病性、低致病性、無(wú)致病性。受禽流感病毒感染后的癥狀：輕度的呼吸道癥狀、消化道癥狀，死亡率較低；較重的全身性、出血性、敗血性癥狀，死亡率較高

四、AI的診斷

一) 病毒的分離與鑒定

采取病雞的呼吸道或竇內滲出物或器官組織,制成懸液，離心沉淀或過(guò)濾以去除組織碎屑；無(wú)菌懸液0.1～0.2ml尿囊腔接種10～11日齡雞胚,在35℃中培養48h。取雞胚的尿囊液,作HA試驗和HI試驗，以鑒定病毒。

二)血清學(xué)試驗

可用來(lái)證實(shí)抗體的存在－－在感染后7d便可被檢測出來(lái)。用于血清學(xué)檢查的方法有：① HI試驗——檢測抗HA抗體。② 雙向免疫擴散試驗(AGP)——檢測抗NP抗體。③ 病毒中和試驗④ 神經(jīng)氨酸酶抑制試驗⑤ ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗).   其他診斷方法：ELISA，PCR等