1. 疏水網(wǎng)膜法(hydrophobic grid-membrane filter, HGMF) 加拿大的Sharp AN博士等(1974)首次報道。其基本原理是:以疏水物質(zhì)在5cm2、孔徑為0.45µm的濾膜上,橫豎各刻印40條線(xiàn),將濾膜分為1600個(gè)小格,以疏水線(xiàn)作為柵欄,防止菌落擴散。樣品稀釋液首先通過(guò)5µm的前濾器過(guò)濾,再通過(guò)0.45µm的HGMF濾膜過(guò)濾,然后根據所需檢驗菌的特性,將濾膜置于不同的選擇培養基上培養24h~48h,陽(yáng)性菌落即可通過(guò)顯色而進(jìn)行鑒定,如果是大腸菌群則呈藍色。根據陽(yáng)性菌落數查“陽(yáng)性菌落數與單位生長(cháng)最近似值換算表”即可得出單位樣品中大腸菌群的MPN。
本法可在24h~30h得出結果,大腸菌群準確率為100%,無(wú)假陽(yáng)性。
該法的優(yōu)點(diǎn)在于:只使用單一的稀釋度,大大減少了檢驗過(guò)程中的隨機誤差和系統誤差;在過(guò)濾時(shí)除掉了所含的一些固體物質(zhì),及一些不利于細菌生長(cháng)的可溶性物質(zhì),便于細菌的生長(cháng);因為濾膜先在營(yíng)養瓊脂上培養4h~5h,再轉移到選擇性培養基,使受傷細菌得以恢復,因此縮短了檢出時(shí)間,提高了靈敏度。
2. TTC顯色法 該法使用的是含有TTC(氯化三苯四氮唑)的乳糖發(fā)酵培養基,接種方法與常規法相同。接種后于35℃~37℃培養18h~24h,觀(guān)察TTC乳糖培養基的顯色和產(chǎn)氣現象來(lái)判斷大腸菌群,然后根據陽(yáng)性管數,查大腸菌群MPN檢索表,報告大腸菌群數。
3. DC半固體試管法 該法是將檢樣稀釋成3個(gè)稀釋度,分別接種于含有DC(去氧膽酸鈉)的半固體培養基中,充分混合,待凝固后,放入37℃溫箱內培養18~24h,根據培養基的顏色和有無(wú)氣泡的產(chǎn)生或瓊脂崩裂現象來(lái)判斷大腸菌群,并根據陽(yáng)性管數查MPN檢索表報告大腸菌群數。
4. 紙片法 該法是將含有溴甲酚紫和TTC成分的培養基浸漬紙片,然后將稀釋成三個(gè)不同稀釋度檢樣分別涂布在三張紙片上,置36±1℃溫箱中培養15h,根據紙片上菌落顏色和菌落周?chē)埰伾珌?lái)判斷大腸菌群,并根據紙片的陽(yáng)性片數,查大腸菌群MPN檢索表進(jìn)行報告
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