乳粉中阪崎腸桿菌的檢測方法（1）

 

摘  要：為乳品企業(yè)開(kāi)展阪崎腸桿菌出廠(chǎng)檢驗尋找更加便捷、準確，且檢測費用低廉的檢測方法。參照SN/T1632.1-2005標準，在定性檢測基礎上有所改進(jìn)。選擇3 種基礎腸道分離培養基伊紅美藍、麥康凱、山梨醇麥康凱分離培養及生化鑒定阪崎腸桿菌．對兩種修復培養基靈敏度進(jìn)行比較及阪崎腸桿菌在5種腸道分離培養基上生長(cháng)情況比較。結果表明, A和B 兩組修復培養對嬰幼兒乳粉中阪崎腸桿菌均能起到修復作用，B組使用BP修復培養比A組蒸餾水修復培養靈敏度 高出1個(gè)稀釋度 (10倍)。阪崎腸桿菌在5種腸道分離培養基上均能生長(cháng)。選擇 上述3種基礎腸道分離培養基分離鑒定阪崎腸桿菌，費用低廉．用于乳品企業(yè)對每批次產(chǎn)品進(jìn)行自檢．有更大的經(jīng)濟效益和社會(huì )效益。

 

0  引  言

2003年1月9日．美國美贊臣公司向美國食品及藥品管理局(FDA)報告要求回收在美國生產(chǎn)的一批罐裝早產(chǎn)兒特殊配方乳粉．回收原因是在該批產(chǎn)品中檢驗出極微量的阪崎腸桿 菌(Enterobacter sakazakii)。此后，“問(wèn)題乳粉”事件迅速引起世界廣泛關(guān)注．污染源阪崎腸桿菌也成為焦點(diǎn)目標^［3］

 

美國食品及藥品管理局(FDA)于2002年提出在嬰幼兒配方乳粉中檢測阪崎腸菌．隨著(zhù) 對阪崎腸桿菌檢測的重視．國家質(zhì)量監督檢驗檢疫總局要求企業(yè)生產(chǎn)的每批次嬰幼兒配方乳粉出廠(chǎng)前都要求進(jìn)行自檢，做到對阪崎腸桿菌檢測工作日�；�。本文參照SN／T1632．1 - -20 05標準定性檢測的基礎上有所改進(jìn)。目的是為進(jìn)一步推動(dòng)乳品企業(yè)對每批次產(chǎn)品進(jìn)行阪崎 腸桿菌出廠(chǎng)檢驗而尋求更加便捷、準確，且檢測費用低廉的檢測方法。

 

( 1) 菌種來(lái)源。阪崎腸桿菌0624標準菌株，由廣東省臨床檢驗中心提供阪崎腸桿菌0 819- -041、0814- 178由本中心分離 。

( 2 ) 培養基。緩沖蛋白胨水(BP)、腸道菌增菌肉湯 (EE)、伊紅美藍(EMB)、麥康凱( Ma cConKey)、山梨醇麥康凱 (SorbitolMacConKey)，營(yíng)養瓊脂(NutirentA—gar)為杭州天和微生 物試劑有限公司生產(chǎn)。腸道計數培養基(VRBGA)，顯色培養基(Xa—GicA )由北京陸橋公司 生產(chǎn)

( 3) 微量生化管。杭州天和微生物試劑有限公司生產(chǎn)，部分為自配。所用培養基經(jīng)實(shí)驗室生物學(xué)質(zhì)控考核，符合微生物生長(cháng)需要。

 

1．2．1 樣品修復培養

無(wú)菌稱(chēng)取100 g乳粉加入500 ml預熱45℃緩沖蛋白胨水中．混勻，經(jīng)36℃±1℃培養 18～24h。 

1．2．2 腸道增茵肉湯培養

移取10 mL加入90 mL EE肉湯中，于36℃±1℃培養18 - 24 h。 

1．2．3分離培養

取EE肉湯培養物1環(huán)．分別劃線(xiàn)接種EMB，MacConKey，SorbitolMacConKey瓊脂平板各1塊．置36℃±1℃ 培養18 ~24h．挑取可疑菌落分純培養。

1．2．4兩種修復培養及培養基

( 1 )取2～8℃冰箱已保存3個(gè)月的阪崎腸桿菌斜面用無(wú)菌生理鹽水制備菌懸液．從10^-1～10^-9作連續10倍稀釋?zhuān)�同時(shí)取10^-9～10^-10。lmL涂布平板各2塊，36℃±1℃培養過(guò)夜， 菌落計數。

(2)取上述菌懸液從10^-9一10^-1分別取0．1mL加入A組：9mL質(zhì)量分數為10％嬰兒乳粉蒸餾水管中；B組：9 mL質(zhì)量分數10％嬰兒乳粉BP培養液中：置36℃± 1 ℃培養1 8～24h

( 3) 取上述A和B培養液9 mL移入90 m的EE肉湯中，于36℃±1℃培養18～24 h， 劃線(xiàn)接種EMB，Mac—ConKey．Sorbitol NlacConKey．VRBGA Xa—GicA瓊脂平板，36℃±1℃培養18~24 h，觀(guān)察結果并記錄(實(shí)驗重復3次)。

1．2．5  在5種分離培養基上情況比較

(1) 取18 - -24 h培養的阪崎腸桿菌新鮮斜面制備菌懸液。 

(2)用無(wú)菌生理鹽水從10^-1 ～10^-9 作連續10倍稀釋?zhuān)��?0^-4，10^-5，10^-6分別取0．1ml涂布2％Nutirent Agar，EM B，MacConKey，SorbitolMacConKey，VRJBGA．Xa—GicA瓊 脂平板．于36℃±1℃培養18 - -24 h，進(jìn)行比較(實(shí)驗重復3次) 。