阪崎腸桿菌噬菌體的分離及其生物學(xué)特性（2）

2   結果

2.1        噬菌體的分離與確證

按照1.6方操作，有5份樣品增值物能使阪崎腸桿菌裂解或在其菌苔上產(chǎn)生裂解區域或噬菌斑的物質(zhì)能夠轉接或純化特性說(shuō)明這些物質(zhì)不是抗生素或細菌霉素。經(jīng)隨機擴增多態(tài)性（RAPD）分析，表明它們?yōu)?株不同的噬菌體，分別命名為SKI、SK2、SK3、SK4、和SK5。

5株噬菌體的工作滴度（RTD）和每mL空斑形成單位（PFU/mL）:SKI為10^-4和4.4×10¹⁰；SK2為10^-2和1.58×10⁹；SK3為10^-2和1.78×10⁷；SK4為10^-2和2.12×10⁶。

2.2噬菌體粒子形態(tài)

5株噬菌體均由多面體的頭部和尾部組成，噬菌體頭部較大，尾部粗長(cháng)，5株噬菌體的整體形態(tài)相似，大小略有差異。

2.3噬菌體生物特性

2.3.1  對ATCC參考菌株的易感性：分別測試了5株噬菌體對阪崎腸桿菌ATCC,29544,29004,12868和51329的敏感性。SKI僅僅對其分離菌株ATCC 29544敏感，并表現出較高的滴度。根據ATCC的信息資料，阪崎腸桿菌ATCC 29544也是用于DNA雜交的參考菌株。SK2,對所有4株阪崎腸桿菌參考菌株敏感，并具有較高滴度。值得注意的是，其宿主ATCC 12868最初是作為陰溝腸桿菌被收集保藏的。SK3除對其宿主ATCC 29004敏感外，還對ATCC 29544, 51329表現出裂解活性。噬菌體SK4和SK5的指示菌為奶粉中分離的阪崎腸桿菌，SK4對ATCC參考菌株均不敏感，而SK5對ATCC的參考菌株產(chǎn)生渾濁的噬菌斑（表1）。

2.3.2  宿主范圍：為準確評價(jià)噬菌體的裂解活動(dòng)性，在測定宿主范圍時(shí)，采用純化后的噬菌體的工作滴度即RTD,除27株阪崎腸桿菌外，還使用了7株腸桿菌科，表2裂解活性。

5株噬菌體SK1，SK2，SK3，SK4，和SK5對非阪崎腸桿菌以外的7株腸桿菌科細菌不敏感。SK1僅能裂解27株分離株中的6株（22％），SK2則能裂解24株（89％），是5株噬菌體中裂解范圍最寬的噬菌體，SK5也表現出較寬的裂解范圍（74％），但是其形態(tài)學(xué)特征不同于SK2，對于SK2而言，63％為完全裂解或融合性裂解（confluent lysis,CL），而SK5，63％的裂解模式（opaque lysis,OL）,詳見(jiàn)表2。對4株ATCC參考菌株不敏感的噬菌體SK4，表現出較窄的裂解范圍，僅能裂解27株實(shí)驗菌株中的4株，而且，只有1株為CL裂解。

表1  分離的噬菌體在阪崎腸桿菌菌苔上行成的空斑形態(tài)及其來(lái)源

Table 1  IsolatedE.sakazakii phages:plaque morphology and source

a:Information from ATCC.b:No plaque.

表2 噬菌體宿主范圍

Table 2   Host ranges specific to the E.sakazakii

“-”Notsensitive;“CL”confluent lysis;“OL”opaque lysis.

 

討論

以來(lái)源于臨床和環(huán)境標本、具有代表性的阪崎腸桿菌作為指示菌，從污水中分離出的5 株阪崎腸桿菌噬菌體，SKI、SK2、SK3、SK4和SK5，在生物學(xué)特性試驗中，表現出清晰的相同的種特異性，但對同種菌株的易感程度卻表現出寬窄不同的范圍。

分離的阪崎腸桿菌噬菌體通過(guò)電子顯微鏡來(lái)觀(guān)察，所釋放噬菌體的頭部為20面體，尾部為較粗長(cháng)尾，根據2005年國際病毒分類(lèi)委員會(huì )第八次報告所提出的分類(lèi)準則，本研究所分離的5株噬菌體的形態(tài)較為符合肌尾噬菌體科(myoviridae) 特征， 5株噬菌的核酸應為d sDNA^［9］。進(jìn)一步通過(guò)DNA分析，顯示這些噬菌體具有不同的基因型，不同的特征反映了阪崎腸桿菌的多樣性。

腸桿菌科細菌的分類(lèi)和命名在近年來(lái)一直在變化。阪崎腸桿菌最初被認為是產(chǎn)黃色素的陰溝腸桿菌。噬菌體SK4和SK5對阪崎腸桿菌參考菌株不敏感，說(shuō)明了地方株和參考菌株之間在某些方面存在著(zhù)差異；僅能裂解其分離宿主ATCC 29544的噬菌體SKI，顯示了其特殊性，因為ATCC 29544是用于DNA 雜交的模式菌株；對4株ATCC菌株均易感的噬菌體SK2，對絕大部分分離菌株也表現出較好的裂解性；最初被稱(chēng)為陰溝腸桿菌保存的、現在被更名為阪崎腸桿菌的參考菌株ATCC12868，也僅能被SK2裂解。上述結果提示我們，噬菌體SKI，SK2和SK3可用于阪崎腸桿菌的分類(lèi)和鑒別。

盡管分離的噬菌體沒(méi)有一種能夠完全裂解27株阪崎腸桿菌，但是按照5株噬菌體的宿主范圍，SK2，SK3，SK4和SK5結合使用能夠裂解27株試驗菌株，在噬菌體被認為是一種消除病原體或減少其危害的有效手段前提下，通過(guò)進(jìn)一步試驗，希望能夠用于嬰幼兒配方粉生產(chǎn)過(guò)程及環(huán)境中阪崎腸桿菌的控制。

作者：趙貴明，仉慶文，姚李四，陳穎

作者單位：中國檢驗檢疫科學(xué)研究院，北京100123

 

參考文獻

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