實(shí)驗室常用貯存液的配制參數（上）

1.30%丙烯酰胺溶液

 

【配制方法】將29g丙烯酰胺和1g N，N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為60ml的水中。加熱至37℃溶解之，補加水至終體積為100ml。用Nalgene濾器(0.45μm孔徑)過(guò)濾除菌，查證該溶液的pH值應不大于7.0，置棕色瓶中保存于室溫。

 

【注意】丙烯酰胺具有很強的神經(jīng)毒性并可以通過(guò)皮膚吸收，其作用具累積性。稱(chēng)量丙烯酰胺和亞甲雙丙烯酰胺時(shí)應戴手套和面具�？烧J為聚丙烯酰胺無(wú)毒，但也應謹慎操作，因為它還可能會(huì )含有少量未聚合材料。一些價(jià)格較低的丙烯酰胺和雙丙烯酰胺通常含有一些金屬離子，在丙烯酰胺貯存液中加入大約0.2體積的單床混合樹(shù)脂(MB-1Mallinckrodt)，攪拌過(guò)夜，然后用Whatman 1號濾紙過(guò)濾以純化之。在貯存期間，丙烯酰胺和雙丙烯酰胺會(huì )緩慢轉化成丙烯酰和雙丙烯酸。

 

2.40%丙烯酰胺

 

【配制方法】把380g丙烯酰胺(DNA測序級)和20g N，N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為600ml的蒸餾水中。繼續按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法處理，但加熱溶解后應以蒸餾水補足至終體積為1L。

 

【注意】見(jiàn)上述配制30%丙烯酰胺的說(shuō)明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列測定。

 

3.放線(xiàn)菌素D溶液

 

【配制方法】把20mg放線(xiàn)菌素D溶解于4ml 100%乙醇中，1：10稀釋貯存液，用100%乙醇作空白對照讀取OD440值。放線(xiàn)菌素D(分子量為1255)純品在水溶液中的摩爾消化系數為21，900，故而1mg/ml的放線(xiàn)菌素D溶液在440nm處的吸光值為0.182，放線(xiàn)菌素D的貯存液應放在包有箔片的試管中，保存于-20℃。

 

【注意】放線(xiàn)菌素D是致畸劑和致癌劑，配制該溶液時(shí)必須戴手套并在通風(fēng)櫥內操作，而不能在開(kāi)放在實(shí)驗桌面上進(jìn)行，謹防吸入藥粉或讓其接觸到眼睛或皮膚。

 

藥廠(chǎng)提供的作治療用途的放線(xiàn)菌素D制品常含有糖或鹽等添加劑。只要通過(guò)測量貯存液在440nm波長(cháng)處的光吸收確定放線(xiàn)菌素D的濃度，這類(lèi)制品便可用于抑制自身引導作用。

 

4.0.1mol/L腺苷三磷酸(ATP)溶液

 

【配制方法】在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH調至pH值至7.0，用蒸餾水定容1ml，分裝成小份保存于-70℃

 

5.10mol/L乙酸酰溶液

 

【配制方法】把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后過(guò)濾除菌。

 

6.10%過(guò)硫酸銨溶液

 

【配制方法】把1g過(guò)硫酸銨溶解于終量為10ml的水溶液中，該溶液可在4℃保存數周。

 

7.BCIP溶液

 

【配制方法】把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二鈉鹽(BCIP)溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃

 

8.2×BES緩沖鹽溶液

 

【配制方法】用總體積90ml的蒸餾水溶解1.07g鹽溶液BES[N，N-雙(2-羥乙基)-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na2HPO4，室溫下用HCl調節　該溶液的pH值至6.96、然后加入蒸餾水定容至100ml，用0.22μm濾器過(guò)濾除菌，分裝成小份，保存于-20℃。

 

9.1mol/L CaCl2溶液

 

【配制方法】在200ml蒸餾水中溶解54g CaCl2?6H2O，用0.22μm濾器過(guò)濾除菌，分裝成10ml小份貯存于-20℃。

 

【注意】制備感受態(tài)細胞時(shí)，取出一小份解凍并用蒸餾水稀釋至100ml，用Nalgene濾器(0.45μm孔徑)過(guò)濾除菌，然后驟冷至0℃。

 

10.2.5mol/L CaCl2溶液

 

【配制方法】在20ml蒸餾水中溶解13.5g CaCl2?6H2O，用0.22μm濾器過(guò)濾除菌，分裝成1ml小份貯存于-20℃。

 

11.1mol/L二硫蘇糖醇(DTT)溶液

 

【配制方法】用20ml 0.01mol/L乙酸鈉溶液(pH5.2)溶解3.09g DTT，過(guò)濾除菌后分裝成1ml小份貯存于-20℃。

 

【注意】DTT或含有DTT的溶液不能進(jìn)行高壓處理。

 

12.脫氧核苷三磷酸(dNTP)溶液

 

【配制方法】把每一種dNTP溶解于水至濃度各為100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/l Tris堿分別調節　每一dNTP溶液的pH值7.0(用pH試紙檢測)，把中和后的每種dNTP溶液各取一份作適當稀釋?zhuān)�在給出的波長(cháng)下讀取光密度計算出每種dNTP的實(shí)際濃度，然后用水稀釋成終濃度為50mmol/L的dNTP，分裝成小份貯存于-70℃。

 

13.0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液

 

【配制方法】在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na?2H2O)，在磁力攪拌器上劇烈攪拌，用NaOH調節　溶液的pH值至8.0(約需20g NaOH顆粒)然后定容至1L，分裝后高壓滅菌備用。

 

【注意】EDTA二鈉鹽需加入NaOH將溶液的pH值調至接近8.0，才能完全溶解。

 

14.溴化乙錠(10mg/ml溶液)

 

【配制方法】在100ml水中加入1g溴化乙錠，磁力攪拌數小時(shí)以確保其完全溶解，然后用鋁箔包裹容器或轉移至棕色瓶中，保存于室溫。

 

【注意】小心：溴化乙錠是強誘變劑并有中度毒性，使用含有這種染料的溶液時(shí)務(wù)必戴上手套，稱(chēng)量染料時(shí)要戴面罩。

 

15.2×HEPES緩沖鹽溶液