吉姆薩與瑞氏染色原理

吉姆薩(Giemsa)染色法：吉姆薩染液由天青，伊紅組成。染色原理和結果與瑞特染色法基本相同。

 

　　嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結果，染粉紅色，稱(chēng)為嗜酸性物質(zhì);細胞核蛋白和淋巴細胞 胞漿為酸性，與堿性染料美藍或天青結合，染紫藍色，稱(chēng)為嗜堿性物質(zhì);中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍均可結合，染淡紫色，稱(chēng)為中性物質(zhì)。

 

　　PH對細胞染色有影響。細胞各種成分均不蛋白質(zhì)，由于蛋白質(zhì)系兩性電解質(zhì)，所帶電荷隨溶液PH而定，在偏酸性環(huán)境中下在電荷增多，易與伊紅結合，染色偏紅;在偏三性環(huán)境中負電荷增多，易與美藍或天青結合，染色偏藍。因此細胞染色對氫離子濃度十分敏感，染色用正經(jīng)片必須清潔，無(wú)酸堿污染。配制頊特液必須用優(yōu)質(zhì)甲醇，稀釋染色必須用緩沖液，沖洗用水應近中性，否則可導致各種細胞染色反應異常，以致識別困難，甚至造成錯誤。

 

　　一般性操作技術(shù)血涂片制備;細胞染色;顯微檢查;血液病診斷;染色不良;瑞特(Wright)染色法;酸性染料;伊紅;堿性染料;亞甲藍;吸附作用;PH對細胞染色的影響;甲醇;吉姆(Giemsa)染色法春天要常用潤膚劑，它含有松香油脂酸和豐富維生素a，常用可加快皮膚血液循環(huán)，剌激面部細胞分泌，有效改善皮膚生理環(huán)境，減少氣候對皮膚的危害。

 

 

　　1.瑞特(Wright)染色法 ：為發(fā)觀(guān)察細胞內部結構，識別各種細胞及其異常變化，血涂片必須嘲行染色。血涂片的各種染色方法大多是羅氏染色法衍變來(lái)的。目前常用瑞特染色法。

 

　　(1)瑞特染料是由酸性染料伊紅和堿性染料亞甲藍組成有復合染料。亞甲藍為四甲基硫堇染料，有對醌型和鄰醌型兩種結構。通常為氯鹽，即氯化美藍。美藍容易氧化為一、二、三甲基硫堇等次級染料。市售美藍中部分已被氧化為天青。伊紅通常為鈉鹽。即伊紅和伊混合后，產(chǎn)生一種憎液性膠體伊紅美藍中性沉淀，即瑞特染料。

 

　　(2)細胞的染色既有物理的吸附作用，又有化學(xué)的親和作用，各種細胞成分化學(xué)性質(zhì)不同，對各種染料的親和力也不一樣。因此，用本染料液染色后，在同一血片上，可以看到各種不同的色彩，例如血紅蛋白，嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結果，染粉紅色，稱(chēng)為嗜酸性物質(zhì);細胞核蛋白和淋巴細胞 胞漿為酸性，與堿性染料美藍或天青結合，染紫藍色，稱(chēng)為嗜堿性物質(zhì);中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍均可結合，染淡紫色，稱(chēng)為中性物質(zhì)。

 

　　(3)PH對細胞染色有影響。細胞各種成分均不蛋白質(zhì)，由于蛋白質(zhì)系兩性電解質(zhì)，所帶電荷隨溶液PH而定，在偏酸性環(huán)境中下在電荷增多，易與伊紅結合，染色偏紅;在偏三性環(huán)境中負電荷增多，易與美藍或天青結合，染色偏藍。因此細胞染色對氫離子濃度十分敏感，染色用正經(jīng)片必須清潔，無(wú)酸堿污染。配制頊特液必須用優(yōu)質(zhì)甲醇，稀釋染色必須用緩沖液，沖洗用水應近中性，否則可導致各種細胞染色反應異常，以致識別困難，甚至造成錯誤。

 

　　新鮮配制的染料偏堿，須在室溫或是37℃下貯存一定時(shí)間，待染料成熟，主要是美藍逐漸轉變?yōu)樘烨郆后才能使用，貯存時(shí)愈久，染色效果愈好。EAM GILLILAND等采用吸光度比值作為頊特染液的質(zhì)量規格。rA測定方法如下：取瑞特染液15-25μl(視染液濃度而定)，加甲醇10ml稀釋?zhuān)�混勻后以甲醇為空折管，分別以波長(cháng)650nm和25nm比色。Ra=a650/a525.因為美藍吸收峰小組長(cháng)為650nm，伊紅吸收峰波長(cháng)為525nm ;天青B吸收峰也為650nm但吸光度A約為美藍的一半。所以新配染料rA接近2，隨著(zhù)美藍逐漸氧化為天青B，RA也相應下降。RA下降到1.3±0.1時(shí)即可使用。瑞特染液貯存過(guò)程中，必須塞嚴，以防止甲醇揮發(fā)和被氧化成甲酸。有人主張在配方中加入甘油30ml，防止甲醇揮發(fā)，關(guān)可合細胞染色清晰。甲醇必須純凈，如甲醇中丙酮含量過(guò)多，染色偏酸，使白細胞著(zhù)色不良。

 

　　2.吉姆薩(Giemsa)染色法 ：吉姆薩染液由天青，伊紅組成。染色原理和結果與瑞特染色法基本相同。但本法對細胞核和寄生蟲(chóng)著(zhù)色較好，結構顯示更不清晰，而胞質(zhì)和中性顆粒則著(zhù)色較差。為兼顧二者之長(cháng)，可用復合染色法。即以稀釋吉姆薩液代替緩沖液，按瑞特染色法染10min�；蛳扔萌鹛厝旧�法染色后，再用稀釋吉姆薩復染。