芒果甙對痤瘡主要致病菌的抑菌作用研究

【摘要】  目的探討芒果甙對痤瘡主要致病菌的抑菌作用，為深度開(kāi)發(fā)芒果樹(shù)藥用植物資源提供研究依據。方法采用液體試管法，進(jìn)行金黃色葡萄球菌的常規培養及痤瘡丙酸桿菌的厭氧培養，按試管稀釋法調整細菌濃度;以紅霉素為對照，觀(guān)察芒果甙對痤瘡丙酸桿菌及金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度(MIC)。結果芒果甙對痤瘡主要致病菌有一定的抑菌作用但不如紅霉素明顯，芒果甙對痤瘡丙酸桿菌的MIC為8mmol/L;對金黃色葡萄球菌的MIC為20mmol/L;而紅霉素對痤瘡丙酸桿菌的MIC為160μmol/L;對金黃色葡萄球菌的MIC為20μmol/L;100μmol/L的芒果甙能把紅霉素的MIC濃度從160μmol/L下降至0.160μmol/L。結論芒果甙可降低紅霉素的最低抑菌濃度，兩者配伍使用，可降低紅霉素的使用劑量。

【關(guān)鍵詞】  芒果甙;丙酸桿菌，痤瘡;葡萄球菌，金黃色;最低抑菌濃度;微生物敏感性試驗

　Abstract:ObjectiveTo investigate suppressive effects of Mangiferin on Propionibacterium Acnes in vitro, so as to provide research evidence for further exploiting the drug plant resources of Mango trees.MethodsA fluid test tubemethod was used to perform normal Staphylococcus aureus culture and Staphylococcus aureus anaerobic culture, and the cell concentrations were regulated in tube　dilution series. The erythromycin was used as control, the minimal inhibitory concentration (MIC) of Mangiferin on Propionibacterium Acnes and Staphylocous aureus were observed.ResultsMangiferin can inhibit the Propionibacterium acnes to some extent, but not as sensitive as erythromycin. The MIC of Mangiferin toPropionibacterium acnes is 8 mmol/L and to Staphylocous aureus is 20mmol/L. TheMIC of erythromycin to Propionibacterium acnes is 160 μmol/L and to Staphylocous aureus is 20 μmol/L. The Mangiferin can change the MIC of erythromycin; 100μmol/L of Mangiferin can reduce the MIC of the erythromycin from 160μmol/L to 0.160 μmol/L.ConclusionMangiferin can reduce the MIC of　erythromycin. When combined with erythromycin, it can reduce the dose usage of erythromycin

　　Key words:Mangiferin; Propionibacterium acnes; Staphylococcus aureus; minimal inhibitory concentration (MIC); microbial sensitivity tests

　　痤瘡俗稱(chēng)“粉刺”、“青春痘”，是一種由多因素引起的常見(jiàn)慢性毛囊、皮脂腺炎癥性皮膚病。有研究[1]表明在痤瘡皮損中存在有多種細菌，其中痤瘡丙酸桿菌及金黃色葡萄球菌為主要致病菌，在痤瘡的不同發(fā)展階段都存在。痤瘡丙酸桿菌存在于痤瘡發(fā)生的多個(gè)環(huán)節中，它能誘發(fā)或加重痤瘡癥狀，用藥物減少皮膚毛囊中主要致病菌的數量是目前治療痤瘡的主要途徑之一。芒果甙是一種四羥基吡啶的碳糖甙，屬雙苯吡酮類(lèi)化合物。有文獻報道[2,3]芒果甙具有抗過(guò)氧化脂質(zhì)、抗炎抗菌的作用。筆者用我實(shí)驗室提取純化的芒果甙對痤瘡丙酸桿菌進(jìn)行體外抑制試驗，現將觀(guān)察到的結果報道如下。

　　1材料與方法

　　1.1材料

　　1.1.1受試菌株痤瘡丙酸桿菌(P.acnes)標準菌株ATCC6919(廣東省微生物研究所菌種保藏中心);金黃色葡萄球菌，菌號ATCC29213，衛生部臨床檢驗中心提供。

　　1.1.2試驗藥物芒果甙為本實(shí)驗室自行從芒果樹(shù)葉中提取純化，按文獻[4]進(jìn)行純度鑒定，純度達98%。紅霉素購自Sigma公司，貨號：E6376。1.1.3儀器及試劑厭氧培養箱YQX-Ⅱ型(上海新苗醫療器械制造有限公司)，光學(xué)顯微鏡為Olympus產(chǎn)品，麥氏比濁管購自溫州市康泰生物科技有限公司;痤瘡丙酸桿菌培養基：碎肉培養基。其他化學(xué)試劑均為國產(chǎn)分析純。

　　1.2方法

　　1.2.1培養基配方碎肉培養基：蛋白胨30g，K2HPO45.0g，酵母提取物5.0g，L-半胱氨酸鹽酸鹽0.5g，碎肉提取浸出液1L，碎肉粒200ml，0.025%刃天青4.0ml。肉湯培養基：牛肉浸液(1∶3)1 000ml，蛋白胨10g，氯化鈉5g。

　　1.2.2供試驗培養基及藥液的制備培養基：將培養基pH值調節為7.1～7.2，分裝入小試管中，塞子密封，經(jīng)121℃高壓滅菌30min置于冰箱4℃中保存備用。芒果甙藥液：稱(chēng)取一定量芒果甙，用2%NaHCO3溶液熱溶解成100mmol/L芒果甙母液，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾除菌備用;紅霉素藥液：稱(chēng)取一定量紅霉素，用無(wú)水乙醇溶液熱溶解成1mmol/L母液，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾除菌備用。

　　1.2.3菌懸液的制備將P.acnes標準菌株轉入碎肉培養基中，放入37℃厭氧培養箱中，厭氧環(huán)境增菌48～72h。取次代培養24h的菌液用生理鹽水稀釋調整為0.5個(gè)麥氏比濁單位(約為1.0×108CFU/ml)，同法配制金黃色葡萄球菌懸液，備用。

　　1.2.4鏡檢觀(guān)察金黃色葡萄球菌和痤瘡丙酸桿菌均為革蘭陽(yáng)性菌，革蘭染色后置于100×100的油鏡鏡檢，鏡下見(jiàn)紫色球或桿菌即為有細菌生長(cháng)。

　　1.2.5藥敏試驗管的制備采用試管稀釋法。芒果甙藥液試驗管：將芒果甙母液用肉湯培養基稀釋成40mmol/L，20mmol/L，10mmol/L，8mmol/L，4mmol/L，2mmol/L，1mmol/L，0.5mmol/L;紅霉素藥液試驗管：將紅霉素藥液用肉湯培養基稀釋成640μmol/L，320μmol/L，160μmol/L，80μmol/L，40μmol/L，20μmol/L，10μmol/L。芒果甙加紅霉素藥液試驗管：將1/1 000上述紅霉素梯度濃度，按1∶1的體積比例分別加到20mmol/L，10mmol/L，8mmol/L，4mmol/L，2mmol/L，1mmol/L，0.5mmol/L芒果甙梯度濃度中，置于試管(每管2　　ml)中即成。同時(shí)設空白對照管、細菌生長(cháng)對照管、陽(yáng)性對照管，每組設4個(gè)復管，觀(guān)察各管細菌生長(cháng)情況。

　　1.2.6菌懸液的接種用定量加樣槍于上述每個(gè)藥液管中加入新鮮配制的稀釋菌液200μl，搖勻，置37℃恒溫、厭氧環(huán)境中培養72h，觀(guān)察結果。

　　1.2.7結果判定所有的空白對照管、藥物陰性對照管培養基均有細菌生長(cháng)，說(shuō)明溶劑對菌　　株生長(cháng)無(wú)影響，對實(shí)驗結果無(wú)干擾。任取兩管中少量菌液涂于載玻片中，經(jīng)革蘭染色，鏡　　檢可見(jiàn)藍色的微小短棒狀桿菌，未見(jiàn)其它雜菌，證明有痤瘡丙酸桿菌生長(cháng)。藥物最小稀釋管　　中細菌不生長(cháng)者為該菌對藥物的敏感度，按照藥液含藥量報告。

　　1.2.8結果記錄細菌生長(cháng)濃度按相應的麥氏比濁管號記錄，0.5號麥氏比濁管細菌的近似濃度為1×108個(gè)/ml，1號麥氏比濁管為3×108個(gè)/ml，2號為6×108個(gè)/ml，3號為9×108個(gè)/ml，4號為12×108個(gè)/ml，5號為15×108個(gè)/ml。

　　2結果

　　2.1紅霉素、芒果甙單獨抑菌作用將紅霉素腸溶片用液體培養基稀釋成640μmol/L，320μmol/L，160μmol/L，80μmol/L，40μmol/L，20μmol/L，10μmol/L，七個(gè)梯度，將芒果甙母液用液體培養基稀釋成40 mmol/L，20mmol/L，10mmol/L，8mmol/L，4mmol/L，2 mmol/L，1mmol/L，0.5mmol/L八個(gè)濃度，觀(guān)察兩種實(shí)驗藥物的最小MIC，結果顯示，紅霉　　素對痤瘡丙酸桿菌的MIC為160μmol/L;對金黃色葡萄球菌的MIC為20μmol/L，芒果甙對痤瘡丙酸桿菌的MIC為8mmol/L;對金黃色葡萄球菌的MIC為20mmol/L(見(jiàn)圖1、圖2)。圖1紅霉素對痤瘡丙酸桿菌及金黃色葡萄球菌的抑制作用圖2芒果甙對痤瘡丙酸桿菌及金黃色葡萄球菌的抑制作用

　2.2紅霉素與芒果甙的協(xié)同抑菌作用設置0.640μmol/L，0.320μmol/L，0.160μmol/L，0.080μmol/L，0.040μmol/L，0.020μmol/L及0.010μmol/L七個(gè)紅霉素低濃度梯度值，與低濃度的芒果甙梯度濃度200μmol/L，100μmol/L，80μmol/L，40μmol/L，20μmol/L，10μmol/L進(jìn)行相互配伍，觀(guān)察各配伍方式對痤瘡丙酸桿菌及金黃色葡萄球菌的抑制作用，結果顯示，0.160μmol/L紅霉素與100μmol/L芒果甙即有強烈的協(xié)同抑菌作用(見(jiàn)圖3，圖4)。3紅霉素與芒果甙對痤瘡丙酸桿菌的協(xié)同抑菌作用

　　3討論

　　3.1痤瘡的臨床癥狀、危害及治療

　　痤瘡是皮膚科的常見(jiàn)疾患，傳統醫學(xué)稱(chēng)之為“肺風(fēng)粉刺”，是一種與性腺內分泌功能失調有關(guān)的毛囊、皮脂腺慢性炎癥性皮膚病。因其好發(fā)于顏面、胸、背等處，形成粉刺、丘疹、膿皰結節或囊腫等損害，嚴重影響著(zhù)人的容顏和身心健康。痤瘡不僅是一種軀體疾病，其在心理、情緒等方面對患者的影響，不亞于嚴重的哮喘、癲癇、糖尿病、關(guān)節炎等疾病，痤瘡患者很容易發(fā)生情緒低落，容易焦慮和憤怒，是一種不容忽視的心身疾病，潛在地影響著(zhù)患者的學(xué)習、工作、運動(dòng)、人際關(guān)系和社會(huì )生活，使患者生活質(zhì)量下降。挖掘新藥，開(kāi)辟溝通渠道，實(shí)施對痤瘡患者的醫藥治療和心理社會(huì )層面的安撫是醫療工作者的社會(huì )責任。一直以來(lái)，用抗生素治療痤瘡是臨床常見(jiàn)的手法，但隨著(zhù)抗生素的不規范使用甚至濫用，導致細菌對藥物的耐藥現象越來(lái)越嚴重，急需開(kāi)發(fā)新的治療方案　　圖4紅霉素與芒果甙對金黃色葡萄球菌的協(xié)同抑菌作用

　　3.2芒果甙治療痤瘡的實(shí)驗室研究結果及價(jià)值分析

芒果甙(亦稱(chēng)木亡果苷)是一種黃酮類(lèi)化合物，存在于芒果樹(shù)葉、扁桃葉、石葦、龍膽、知母等多種植物中，具有多重藥效作用[2～6]，市場(chǎng)前景廣闊，其更多的藥效品質(zhì)值得深入開(kāi)發(fā)與探索。本研究設計采用液體試管法，進(jìn)行金黃色葡萄球菌的常規培養及痤瘡丙酸桿菌的厭氧培養，按試管稱(chēng)釋法調整細菌濃度，以紅霉素為對照，觀(guān)察芒果甙對痤瘡丙酸桿菌及金黃色葡萄球菌的MIC。實(shí)驗結果顯示，芒果甙對痤瘡主要致病菌有一定的抑菌作用但不如紅霉素明顯，芒果甙對痤瘡丙酸桿菌的MIC為8mmol/L;對金黃色葡萄球菌的MIC為20mmol/L;而紅霉素對痤瘡丙酸桿菌的MIC為160μmol/L;對黃色葡萄球菌的MIC為20μmol/L;100μmol/L的芒果甙能把紅霉素對痤瘡丙酸桿菌的MIC濃度從160μmol/L下降至0.160μmol/L。芒果甙與紅霉素配合使用時(shí)，可起到“藥引”性作用，100μmol/L芒果甙可使紅霉素對痤瘡丙酸桿菌最低抑菌濃度從160μmol/L降至0.160μmol/L，降低了紅霉素的使用量，據此有望成為紅霉素的新藥引之一。

作者：葉海洪，農朝贊，黃嬋娟，黃之虎，潘莉莉 農少云，韋仕喻，郭凌霄，吳玉清

  　[1]張佳君，張曉東,劉四海.痤瘡丙酸桿菌對中藥痤瘡飲敏感性的探討[J].中藥藥理與臨床,2010,26(1):68-70.

　　[2]譚安雄,錢(qián)鳳,朱耀斌,等.芒果苷對易卒中型自發(fā)性高血壓大鼠腦缺血再灌注后炎性因子的影響[J].中華高血壓雜志,2010,18(4):380-384.

　　[3]李學(xué)堅,鄧家剛,覃振林,等.芒果苷、小檗堿組合物抑菌、抗炎、鎮痛作用的研究[J].中國中醫藥科技,2010,17(1):36-37.

　　[4]周志勇,袁丁,黃鶴飛.天然產(chǎn)物抗單純皰疹病毒的研究進(jìn)展[J].中國藥房,2010,21(3):383-385.

　　[5]姚奕斌,彭志剛,劉振芳,等.芒果苷對白血病HL-60細胞周期及CDC2/CyclinB1表達的影響[J].中藥材,2010,33(1):81-85.

[6]林周孟,何春拉,孟曉靜.芒果甙抗腫瘤作用研究進(jìn)展[J].實(shí)用醫學(xué)雜志,2009,25(4):663-664.