實(shí)驗——化學(xué)因素對微生物的影響

1 目的

1.1 了解化學(xué)因素對微生物生長(cháng)的影響

1.2 掌握檢測pH值、化學(xué)藥劑對微生物生長(cháng)影響的方法

2 原理 

抑制或殺死微生物的化學(xué)因素種類(lèi)極多，用途廣泛，性質(zhì)各異。其中表面消毒劑和化學(xué)藥劑最為常見(jiàn)。表面消毒劑在極低濃度時(shí)，常常表現為對微生物細胞的刺激作用，隨著(zhù)濃度的逐漸增加，就相繼出現抑菌和殺菌作用，對一切活細胞都表現活性�；瘜W(xué)藥劑主要包括一些抗代謝物，例如抗生素等。在微生物實(shí)驗中，pH值的變化也對微生物生長(cháng)有很大影響。

3 材料

3.1 菌種

大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、釀酒酵母菌、青霉菌、灰色鏈霉菌。

3.2 培養基

肉膏蛋白胨培養基、葡萄糖蛋白胨培養基、豆芽汁葡萄糖培養基、察氏培養基。

3.3 藥品

土霉素、新潔爾滅、復方新諾明、汞溴紅(紅藥水)、結晶紫液(紫藥水)。

3.4 其他物品

培養皿、無(wú)菌圓濾紙片、鑷子、無(wú)菌水、無(wú)菌滴管、水浴鍋、振蕩器、游標尺、分光光度計。

4 流程

4.1化學(xué)藥劑對微生物生長(cháng)的影響

無(wú)菌培養皿→配菌懸液→滴加菌樣→倒平板→藥劑處理→培養→觀(guān)察結果

4.2不同pH對微生物生長(cháng)的影響

配培養基→配菌懸液→接種→培養→觀(guān)察結果 

5 步驟

5.1化學(xué)藥劑對微生物生長(cháng)的影響

5.1.1配制菌懸液

取培養18—20h的大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌斜面各1支，分別加入4m1無(wú)菌水，用接種環(huán)將菌苔輕輕刮下、振蕩，制成均勻的菌懸液，菌懸液濃度大約為106cfu/mL。

5.1.2滴加菌樣

首先取3個(gè)無(wú)菌培養皿，每種試驗菌一皿，在皿底寫(xiě)明菌名及測試藥品名稱(chēng)。然后分別用無(wú)菌滴管加菌4滴(或0.2m1)菌液于相應的無(wú)菌培養皿中。

5.1.3制含菌平板

將融化并冷卻至45—50℃的肉膏蛋白胨培養基傾入皿中約12ml～15m1，迅速與菌液混勻，冷凝備用。

5.1.4化學(xué)藥劑處理

用鑷子取分別浸泡在土霉素、復方新諾明、新諾爾滅、紅汞和結晶紫藥品溶液中的圓濾紙片各一張，置于同一含菌平板上。

5.1.5培養

片刻后，將平板倒置于37℃溫箱中，培養24h。

5.1.6觀(guān)察結果

觀(guān)察抑菌圈，并記錄抑菌圈的直徑。

5.2不同pH對微生物生長(cháng)的影響

5.2.1配制培養基

肉膏蛋白胨液體培養基（標記A），配制豆芽汁葡萄糖液體培養基（標記B），分別調pH至3、5、7、9和ll，每pH值培養基3管，每管盛培養液5m1，滅菌備用。

5.2.2配置菌懸液

取培養18—20 h的大腸桿菌、釀酒酵母菌斜面各1支，加入無(wú)菌水4ml，制成菌懸液。

5.2.3接種與培養

A培養基中接種大腸桿菌液l滴(或0.1毫升)、搖勻，置37℃溫箱中培養24h。B培養基接種1滴(或o．1m1)，搖勻，置28℃溫箱中培養24h。

5.2.4觀(guān)察結果

根據菌液的混濁程度判定微生物在不同pH生長(cháng)情況。

6 思考

6.1上述多個(gè)試驗中，為什么選用大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和枯革芽孢桿菌作為試驗菌?

6.2說(shuō)明青霉素和鏈霉素的作用原理。

6.3通過(guò)實(shí)驗說(shuō)明芽孢的存在對消毒滅菌有什么影響?