1目的
1.1理解冷凍干燥保藏菌種的原理
1.2掌握冷凍干燥保藏菌種的方法。
2 原理
冷凍干燥保藏菌種法可克服簡(jiǎn)單保藏方法的不足。利用有利于菌種保藏的—切因素，使微生物始終處于低溫、干燥、缺氧的條件下，因而它是迄今為止最有效的菌種保藏法之一。
3 材料
3.1 菌株
待保藏的各種菌種。
3.2試劑
2% HCl；牛奶。
3.3器具
安瓿管、標簽、長(cháng)滴管、脫脂棉、干冰、離心機、冷凍真空裝置、高頻電火花器。
4 流程
備安瓿管→備脫脂乳→制菌懸液→分裝→預凍→真空干燥→保藏→活化
5步驟
5.1準備安瓿管
安瓿管先用2%HCl浸泡，再水洗多次，烘干。將標簽放入安培管內，管口塞上棉花，滅菌備用。
5.2制備脫脂乳
用鮮奶經(jīng)處理或使用脫脂奶粉配兌脫脂牛奶，滅菌，并做無(wú)菌試驗后備用。
5.3制菌懸液
將無(wú)菌牛奶直接加到待保藏的菌種斜面內，用接種環(huán)將菌種刮下，輕輕攪亂使其均勻地懸浮在牛奶內成懸浮液。
5.4分裝
用無(wú)菌長(cháng)滴管將懸浮液分裝入安瓿管底部，每支安培管的裝量約為0.9毫升。(一般裝入量為安瓿管球部體積的1／3)
5.5預凍
將分裝好的安瓿管在-25至-40之間的干冰酒精中進(jìn)行預凍1小時(shí)；或在冰箱冷凍室進(jìn)行預東。
5.6真空干燥
預凍以后，將安瓿管放入真空器中，開(kāi)動(dòng)真空泵進(jìn)行干燥。
5.7封管
封管前將安瓿管裝入歧管；真空度抽至0.01毫米汞拄后，再用火焰熔封，封好后，要用高頻火花器檢查各安瓿管的真空情況。如果管內呈現灰藍色光，證明保持著(zhù)真空。檢查時(shí)高頻電火花器應射向安瓿管的上半部。
5.8保藏
做好的安瓿管應放置在低溫避光處保藏。
5.9活化
如果要從中取出菌種恢復培養，可先用75%酒精將管的外壁消毒，然后將安瓿管上部在火焰上燒熱，再滴幾滴無(wú)菌水，使管子破裂。在用接種針直接挑取松散的干燥樣品，在斜面接種。
6結果
6.1簡(jiǎn)述真空冷凍干燥保藏菌種的原理。
6.2 記錄大腸桿菌斜面作液體石蠟封藏和枯草桿菌作沙土管保藏的要點(diǎn)。
7思考
7.1菌種保藏中，石蠟油的作用是什么？
7.2經(jīng)常使用的細菌菌株，使用那種保藏方法比較好？
7.3沙土管法適合保藏那一類(lèi)微生物？
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