DNA疫苗在病毒性傳染病中的研究應用

在基因疫苗的概念提出不久后,第一個(gè)HIV基因疫苗項目即獲準進(jìn)入Ⅰ期臨床試驗,現有流感病毒、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、麻疹病毒、人乳頭狀瘤病毒(HPV)、單純皰疹病毒(HSV)、瘧原蟲(chóng)、淋巴瘤、直腸癌等數十個(gè)方案經(jīng)FDA批準進(jìn)入臨床試驗。

1.DNA疫苗與流感病毒

　　流感是由流感病毒引起的一類(lèi)高傳染性的上呼吸道疾病,病毒經(jīng)呼吸道粘膜感染并隨著(zhù)病毒表面抗原的變異而不斷復制,以往采用失活或減毒活疫苗來(lái)預防流感。Ulmer等將帶有流感病毒核蛋白基因的質(zhì)粒注射入小鼠肌內,觀(guān)察到小鼠體內產(chǎn)生了CTL效應。與對照組相比,用致死量同株流感病毒及同型異源株流感病毒去攻擊免疫小鼠,顯示有90%的生存率。另外,Vecino等也有相似的發(fā)現。最近,又有學(xué)者報道應用基因槍免疫編碼流感HA/NPCTL表位的小基因質(zhì)粒載體,在小鼠模型上可誘發(fā)較為理想

的CTL反應,但其對于流感病毒再次感染的防御能力尚不夠理想。

2.DNA疫苗與肝炎病毒

　　HBV和HCV是引起慢性肝炎、肝硬化甚至肝細胞肝癌的主要嗜肝病毒。研究中的HBVDNA疫苗的抗原基因片段,主要是編碼表面抗原的S區,也可包括preS1、preS2區。Geissler等將包含preS1、preS2的S區基因以及HBcAg編碼基因的重組質(zhì)粒接種小鼠,誘導產(chǎn)生了高滴度抗-HBs及抗-HBc,93%的小鼠產(chǎn)生了強烈的針對病毒蛋白的CD4+T細胞介導的體液免疫和CD8+T細胞介導的CTL效應,伴有Th1細胞因子的產(chǎn)生。Chow等構建了HBV膜蛋白和IL-2共同表達的質(zhì)粒(兩者有各自的CMV啟動(dòng)子),用該質(zhì)粒作DNA疫苗免疫小鼠時(shí),同單獨表達HBV膜蛋白的質(zhì)粒免疫的小鼠相比,引發(fā)的體液和細胞免疫效率至少提高了100倍。

　　此外,在近期的HBVDNA疫苗Ⅰ期臨床研究中,10例對于正規治療無(wú)反應的慢性活動(dòng)性肝炎患者在接受3次HBV包膜蛋白的基因疫苗肌注后,有半數患者的血清HBVDNA水平下降,并有1例患者的血清HBVDNA水平完全轉陰,表明了疫苗免疫后產(chǎn)生了HBV特異性T細胞反應并具有抗病毒作用。

　　HCVDNA疫苗主要是采用C區、E1、E2、NS3、NS4、NS5區。研究發(fā)現,將HCVⅠa型的C區基因和少量5′非編碼區(5′-NC)和包膜區基因置入CMV啟動(dòng)子和增強子下,構建的pHCVC重組質(zhì)�？稍诮臃N的小鼠肌細胞中表達,并產(chǎn)生相應抗體。Cho等研究顯示,以?xún)H帶有包膜抗原基因(E區)的質(zhì)粒免疫動(dòng)物,可激起機體的體液和細胞免疫,但同時(shí)構建HCV/E和GM-CSF融合基因質(zhì)粒時(shí)可進(jìn)一步加強免疫反應。最近還有報道稱(chēng),表達HCV包膜蛋白E1、E2的質(zhì)�？煞謩e誘導出體液或細胞免疫反應,而CpG作為免疫佐劑可明顯增強細胞應答。

3.DNA疫苗與艾滋病病毒

　　在免疫缺陷病毒(HIV和SIV)研究中,Wang等用編碼HIV-1被膜抗原的gp160重組質(zhì)粒pM160免疫小鼠后,血清學(xué)分析證明實(shí)驗小鼠中80%產(chǎn)生抗gp160的中和抗體。該重組質(zhì)粒接種小鼠脾細胞后,可表現HIV-1包膜特異性的增殖反應以及CTL應答,提示了pM160質(zhì)粒注射入小鼠體內可同時(shí)誘導CD4介導的體液免疫和CD8介導的細胞免疫。后來(lái),Someya等采用DNA免疫方法,將兩個(gè)不同的DNA質(zhì)粒接種黑猩猩,經(jīng)加強免疫后均有特異的細胞和體液免疫應答。

4.DNA疫苗與其它病毒

　　Zhang等發(fā)現,應用日本腦炎病毒與E蛋白構建的重組質(zhì)粒具有免疫原性,并可對小鼠的腦炎病毒感染起防御作用,其保護率達75%。此外,登革病毒E/N蛋白、狂犬病病毒糖蛋白GP、麻疹病毒HA/NP蛋白及HEV結構蛋白的DNA疫苗都在哺乳動(dòng)物實(shí)驗中取得了一定的突破。