【摘要】  目的 探討農藥殘留的快速檢測方法 方法 采用快速測定方法—酶抑制法。 結果 通過(guò)對5 添加農藥的蔬菜測定，其回收率 85%～105%，與氣相色譜法的測定結果基本 致。結論 酶抑制法可以用于蔬菜中農藥殘留的快速測定。

【關(guān)鍵詞】  農藥殘留;酶抑制法;氣相色譜法;測定

     目 我國有機磷和氨基甲酸酯類(lèi)農藥殘留的分析方法有氣相色譜法、薄層色譜法以及快速測定方法—酶抑制法。氣相色譜法雖是國家標準方法，但要求條件較高，必須具備氣相色譜儀并配有火焰光度檢測器(FPD)或氮磷檢測器(NPD），有適合的色譜柱等，需要昂貴的儀器設備；薄層色譜法檢測方法繁雜，操作難度較 ；酶抑制法雖然不是國標法，但具有檢測快速、設備和試劑簡(jiǎn)單、成本低等特點(diǎn)，適合水果蔬菜上市前農藥殘留毒性的檢測，受到基層疾病預防控制機構的普遍歡迎。

    1.1   試劑配制   （1) pH8.0緩沖溶液：分別取11.9g無(wú)水磷酸氫二鉀與362g磷酸二氫鉀，用 1000ml蒸餾水溶解。(2)顯色劑4g/L：分別取80mg二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)和15.6 mg碳酸氫鈉，用20ml緩沖溶液溶解，置于4℃冰箱中保存。(3)底物21.67g/L：取65mg硫代乙酰膽堿，加3.0ml蒸水溶解，搖勻后，置4℃冰箱中保存備用。(4)乙酰膽堿酯酶：3.0mg/L用緩沖溶液溶解，搖勻后，置4℃冰箱中保存備用。(5)有機磷標準儲備液：將從國家農藥質(zhì)檢中心購買(mǎi)的甲氨磷、敵百蟲(chóng)、樂(lè )果、克百威和滅 威餌品用丙酮配制成1g/L的溶液。標準使用液臨用前配制。

    1.2   使用儀器    CL-F2000殘留農藥測定儀(上海復淳軟件科技發(fā)展有限公司)；氣相色譜儀：上海天普分析儀器有限公司GC900A高性能氣相色譜儀。

    1.3   操作方法   每 樣品做平行樣，首先在試管中加入有機磷標液后，然后分別加入3.0ml緩沖液，50μl乙酰膽堿酯酶液，100μl顯色劑，搖勻后，在37℃放置15min，加入40μl底物；在0.5min內混合均勻，30s后，立即用F2000測定儀進(jìn)地測定，F2000型快速測定儀記錄1min酶抑制率I%，CK為酶活性的大小。

    計算公式：回收率(%)=（I%/I0）×100

    式中I%—(菜 +標)提取后測定的抑制率減去菜的空白抑制率；

    I0%—直接測定加入農藥抑制率。

    2.1   條件選擇

    2.1.1   酶活性的測定   分別加入20、40、80μl酶，其他試劑為緩沖溶液3ml，顯色劑100μl，底物20μl。測定結果可見(jiàn)，1、2、3 min的線(xiàn)性相似。但酶活性隨著(zhù)酶的 量增加而增加。隨著(zhù)時(shí)間的變化，酶的活性不斷下降。因此，測定的時(shí)間應定為 1或 2 min之內。酶量較少時(shí)，靈敏度較低，但酶量大時(shí)，靈敏度雖高，但變化較快，使反應不穩定，故取中間值50μl的酶量較佳。

    2.1.2   溫度、時(shí)間、底物與條件的選擇   在室溫放置與水浴37℃放置酶的活性不同，37℃放置15和20min，酶的活性也不同。實(shí)驗結果表明，溫度過(guò)低與時(shí)間過(guò)長(cháng)，酶的活性均較低；37℃放置15min反應，酶的活性較高。底物應足夠量，否則，反應不夠完全。故取40μl底物為佳。

    2.2   標準曲線(xiàn)的測定   將 6種農藥1g/L的丙酮標準儲備液，用蒸餾水稀釋為甲氨磷10mg/L，毒死蜱100mg/L，敵百蟲(chóng)0.1mg/L，樂(lè )果100mg/L，克百威1mg/L，滅多威10mg/L。抑制率：甲氨磷為84.55%，毒死蜱為98.45%，敵百蟲(chóng)為94.32 %，樂(lè )果為48.43 %，克百威為92.76 %，滅多威為88.85 %�？税偻�、敵百蟲(chóng)的相關(guān)系數可達到0.99，其他幾種農藥達到0.96～0.9，由此證明本方法可以作為篩選方法，確證還需要經(jīng)過(guò)氣相色譜法測定。

    2.3   回收率   在蔬菜中添加農藥，用快速測定儀測定，見(jiàn)表1。表1   回收率測定結果由此可見(jiàn)，蔬菜中加標的回收率為85%～105%，能滿(mǎn)足實(shí)驗要求。

    2.4   精密度   按照2.3添加農藥標準，用快速測定儀測定。由此可見(jiàn)精密度范圍在0.9%～4.3%，滿(mǎn)足實(shí)驗要求。

    2.5   樣品測定結果   將加標樣用快速檢測方法和氣相色譜法測定，樣品取樣量為10.0g。測定結果表明，兩種方法測定結果基本一致。

    綜上所述，可以得出快速測定法—酶抑制法能夠可滿(mǎn)足大批樣品農藥殘留的篩選，但對于抑制率超過(guò)30%的樣品，應及時(shí)進(jìn)行氣相色譜的分析，以進(jìn)一步確定農藥的種類(lèi)和濃度。

    4.1   快速測定法時(shí)間   加入底物混勻30s后定時(shí)，1min后測定。并保證混勻過(guò)程時(shí)間一致，一般實(shí)驗人員都可在30s內操作完畢。

    4.2   溫度和時(shí)間   酶抑制的溫度和時(shí)間對酶的活性影響較大，應該嚴格控制。

    4.3   氣相色譜測定   如果有機磷或氨基甲基甲酸酯類(lèi)品種增加，可適當增加色譜的柱長(cháng)度。

 

 作者：馬愛(ài)霞《中華醫藥雜志》