2005年9月，本中心接到報告，有2例因吃蛋糕引起的以嘔吐、腹痛、腹瀉 主要癥狀的患者，我們立即 往采樣，并在2例患者吃剩的蛋糕中檢出 株不典型的金黃色葡萄球菌，現將分離鑒定的過(guò)程報告如下
1 材料與方法
1.1 材料 檢驗材料為患者吃剩的蛋糕。
1.2 方法
1.2.1 實(shí)驗儀器和試劑 實(shí)驗儀器：恒溫培養箱、梅里埃ATB Expression 細菌鑒定儀及VIDAS免疫診斷分析系統，試劑：甘露醇高鹽瓊脂購自廣東環(huán)凱微生物科技公司，血平板（使用人血）、卵黃瓊脂平板、1mol/L的鹽酸、3%H2O2為本單位自制，生化鑒定用的ID32 STAPH細菌鑒定卡及VIDAS葡萄球菌腸毒素試劑盒為法國梅里埃公司生產(chǎn)，其余均購自北京陸橋技術(shù)責任有限公司，試劑均在有效期內使用。
1.2.2 檢驗方法 按GB/T4789.10—2003《食品衛生微生物檢驗》［1］，DNA酶測定按《微生物學(xué)和微生物學(xué)檢驗》［2］中的方法，細菌鑒定卡、葡萄球菌腸毒素的檢測按法國梅里埃試劑使用說(shuō)明書(shū)操作。
2 結果
2.1 增菌及分離 剩余蛋糕經(jīng)7.5％NaCl肉湯增菌后，同時(shí)接 于血平板、甘露醇高鹽瓊脂平板上，37℃培養24h后，取出觀(guān)察菌落形態(tài)，在血平板上見(jiàn)白色、不透明、圓形、光滑、突起、周?chē)型该魅苎�、直徑約1mm的小菌落；在甘露醇高鹽瓊脂平板上見(jiàn)黃色、圓形、光滑、突起、直徑約1mm的優(yōu)勢菌落。挑起以上兩種形態(tài)的單 菌落各3個(gè)做革蘭染色鏡檢，均為革蘭陽(yáng)性球菌、部分呈葡萄狀排列，同時(shí)接種于營(yíng)養瓊脂平板和雙糖管上，置37℃、24h做純培養。取純培養物劃線(xiàn)接種Baird-Parker平板及卵黃瓊脂平板上，置37℃、24h培養，在Baird-Parker平板呈圓形、光滑、突起、黑色、其周?chē)鷧s不見(jiàn)渾濁帶和透明圈，且直徑約為0.7～1mm。在卵黃瓊脂平板上呈圓形、光滑、突起、原始區的菌苔呈淡黃色、單個(gè)菌落呈白色、直徑約為1～1.3mm、其周?chē)梢?jiàn)渾濁帶和透明圈。
2.2 生化試驗 取營(yíng)養瓊脂平板上的純培養菌落做下列生化試驗：氧化酶(-)，觸酶(+)，血漿凝固酶：玻片法(+)，試管法(+)，DNA酶(+)，按要求將菌液接種于ID32 STAPH細菌鑒定卡，置37℃培養24h后用梅里埃ATB細菌鑒定儀自動(dòng)讀 ，判斷為非常好的鑒定結果，99.7%符合金黃色葡萄球菌，全部生化反應見(jiàn)表1。將菌株送廈門(mén)市CDC做葡萄球菌腸毒素檢測，用自動(dòng)定量酶聯(lián)熒光免疫分析法測定，選用法國梅里埃公司生產(chǎn)VIDAS葡萄球菌腸毒素(SET2)試劑盒，產(chǎn)品編號：30705，結果判斷：TV值小于0.13為陰性、 于或等于0.13為陽(yáng)性，在此試驗中陰性質(zhì)控樣TV值為0.00、陽(yáng)性質(zhì)控樣TV值為1.00、菌株的TV值為2.32，即該菌株葡萄球菌腸毒素為陽(yáng)性。表1 生化反應結果
3 討論
典型的金黃色葡萄球菌在血平板上的菌落形態(tài)為金黃色、圓形、光滑、大而突起、周?chē)腥苎�；�?SPAN lang=EN-US>Baird-Parker平板上為圓形、光滑、突起、直徑約2～3mm、菌落中心呈灰黑色、周?chē)幸粶啙釒�，在其外層有一透明圈。而此次分離到的金黃色葡萄球菌在血平板上雖為圓形、光滑、周?chē)腥苎�，但因其不產(chǎn)生色素而呈白色，且菌落較小直徑約1mm；在Baird-Parker平板上雖呈黑色、其周?chē)鷧s不見(jiàn)渾濁帶和透明圈（可能是凍干的卵黃較難溶解之故），直徑約為0.7～1mm，很容易導致漏檢，又因此菌株為能引起食物中毒的腸毒素陽(yáng)性的金黃色葡萄球菌，所以提醒各位同仁在金黃色葡萄球菌的檢驗中，不僅要注意典型菌落，對 種在血平板上呈白色、有透明溶血圈、較小的菌落也要重視，建議先做革蘭染色鏡檢及血漿凝固酶試驗篩檢，若符合，再繼續做各項試驗鑒定，以提高金黃色葡萄球菌的檢出率，防止漏檢。
【參考文獻】
1 中華人民共和國衛生部/中國國家標準化管理委員會(huì )．GB/T4789.1～4789.31-2003，67-69.食品衛生微生物檢驗.
2 俞樹(shù)榮.微生物學(xué)和微生物學(xué)檢驗，第2版．北京：人民衛生出版社，114.
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