頭孢哌酮鈉細菌內毒素檢查方法研究

【摘要】 目的  通過(guò)試驗確定頭孢哌酮鈉細菌內毒素的具體檢測方法 方法  選擇相應靈敏度的鱟試劑，進(jìn)行干擾試驗，研究細菌內毒素檢查方法。結果  用靈敏度0.125EU/ml的鱟試劑，同時(shí)將供試品2倍稀釋?zhuān)�進(jìn)行細菌內毒素檢查，沒(méi)有出現干擾作用。 結論  頭孢哌酮鈉的熱原檢查可用細菌內毒素檢測法。

   

    頭孢哌酮鈉屬于β-內酰胺類(lèi)抗生素，臨床上主要用于治療革蘭陰性菌、綠膿桿菌引起的呼吸系統、泌尿系統的感染�！吨袊�藥典》2000年版頭孢哌酮鈉的熱原檢查仍采用家兔法， 了探討其細菌內毒素檢查方法，本文參照《中國藥典》的要求，通過(guò)干擾試驗，確立了頭孢哌酮鈉的細菌內毒素檢查方法。

    鱟試劑（TAL，批號:0312081，靈敏度:0.125EU/ml，規格:0.1ml/支，湛江安度斯生物有限公司）;細菌內毒素檢查用水（BET水，批號:0403080，規格:5ml/支，湛江安度斯生物有限公司）;細菌內毒素工作標準品（CSE，批號:0401170，規格:12EU/支，湛江安度斯生物有限公司）;頭孢哌酮鈉（供試品，批號:31820907，31820204，31820610，珠海聯(lián)邦制藥廠(chǎng)生產(chǎn)）;BET-40細菌內毒素檢查儀;ZH-2自動(dòng)旋渦混合器。

    2.1 TAL靈敏度的復核 按《中國藥典》附錄 ［1］ 細菌內毒素檢查法進(jìn)行復核，結果見(jiàn)表1，表明標示靈敏度為0.125EU/ml的TAL符合規定。

    表1 鱟試劑靈敏度的復核 內毒素濃度（略）

    2.2 細菌內毒素限值（L）的確定 ［2］  按公式L=K/M，式中K為規定給藥途徑，即人用每公斤體重每小時(shí)最 可接受的內毒素劑量，注射劑K=5.0EU/（kg·hr）;M為人用每公斤體重每小時(shí)最大劑量，以ml/（kg·hr）、mg/（kg·hr）、U/（kg·hr）表示，人均體重按60kg計算，注射時(shí)間小于1h按1h計算。參考藥師手冊 ［3］，M=100mg/（kg·hr），計算內毒素限值L=0.05EU/mg。

    2.3 供試品的干擾預試驗

    2.3.1 內毒素及供試品的稀釋 用BET水將CSE稀釋成0.25、0.125、0.06、0.03EU/ml濃度的內毒素備用;根據最大有效稀釋倍 MVD=CL/λ，L為供試品的細菌內毒素限值，λ為本次試驗選用的鱟試劑的靈敏度;C為供試品溶液的濃度5mg/ml，由此計算得最大有效稀釋倍數MVD為2倍。對于靈敏度0.25、0.125、0.06、0.03EU/ml的鱟試劑，頭孢哌酮鈉選擇稀釋倍數分別為1、2、4、8倍，用BET水將1批供試品（批號31820907）稀釋成以上4 濃度備用。

    2.3.2 干擾預試驗 取10支靈敏度為0.125EU/ml的鱟試劑，其中5支做供試品陰性對照（NPC）系列反應;另外5支做供試品陽(yáng)性對照（PPC）系列反應。試驗結果見(jiàn)表2。表明供試品陰性對照液系列反應全部陰性。供試品陽(yáng)性對照液在供試品稀釋倍數<2時(shí)為陰性，≥2時(shí)為陽(yáng)性。表明供試品在較高濃度時(shí)對細菌內毒素有抑制干擾作用，而供試品至少2倍稀釋并選用靈敏度為0.125EU/ml的鱟試劑則無(wú)干擾作用。

    表2 頭孢哌酮鈉預試驗結果 供試品（略）

    2.4 供試品干擾試驗 用細菌內毒素檢查用水和稀釋2倍的3批供試品分別將同 支細菌內毒素工作標準品制成含細菌內毒素工作標準品0.25EU/ml、0.125EU/ml、0.06EU/ml、0.03EU/ml4 濃度的內毒素溶液，每一濃度平行做4支，另取細菌內毒素檢查用水和供試品溶液各2支作為水溶液陰性對照管和供試品陰性對照管.分別對31820907、31820204、318206103批樣品做干擾試驗。結果見(jiàn)表3。表 明λc=λs=0.125EU/ml，即λc、λs都在0.5～2λ范圍內，表明供試品經(jīng)2倍稀釋?zhuān)�使用靈敏度0.125EU/ml的鱟試劑對細菌內毒素無(wú)干擾，進(jìn)一步驗證了預實(shí)驗的結果。

    表3 供試品干擾試驗結果 內毒素濃度（略）

    2.5 細菌內毒素檢查 根據《中國藥典》細菌內毒素檢查法，將3批供試品2倍稀釋?zhuān)�與0.125EU/ml鱟試劑進(jìn)行細菌內毒素檢測，并同時(shí)進(jìn)行3批供試品的家兔熱原對比試驗，均符合藥典對其有效性的規定。

    3.1 干擾預試驗的目的是評價(jià)供試品濃度對鱟試劑與細菌內毒素凝集反應的干擾程度，以便初步篩選出其干擾試驗的起始濃度。 樣既可以避免干擾試驗的盲目性，同時(shí)又節省了大量的時(shí)間和鱟試劑，降低了成本，提高了工作效率。

    3.2 熱原檢查可用細菌內毒素檢查代替家兔法，檢查時(shí)只要將其稀釋?zhuān)�選擇相應靈敏度的鱟試劑即可進(jìn)行。

    3.3 通過(guò)試驗表明，頭孢哌酮鈉熱原檢查可用細菌內毒素檢查法代替傳統的家兔法，檢查時(shí)只要將其至少2倍稀釋?zhuān)�選擇相應靈敏度的鱟試劑，即可進(jìn)行。該法與傳統的家兔熱原法相比，具有操作簡(jiǎn)便快捷，結果準確，檢測靈敏高，實(shí)用性強等優(yōu)點(diǎn)。

 

    1 國家藥典委員會(huì ).中國藥典，北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2000年版（二部）:附錄XIE.

    2 夏振民.藥品細菌內毒素檢查的限值.藥物分析雜志，1995，15（3）:54.

    3 裘學(xué)友，孫定人，喻維新.藥師手冊，北京:人民軍醫出版社，1999，323.