醫院感染葡萄球菌分離鑒定及耐藥性分析

摘　要： 目的　了解葡萄球菌的致病性及藥敏情況，為醫院感染控制提供參考。方法　對從醫院感染患者標本中分離出的118株葡萄球菌進(jìn)行詳細鑒定，并進(jìn)行MRS檢測、β-內酰胺酶試驗、藥敏試驗MIC測定等，結合臨床相關(guān)資料進(jìn)行分析。　結果　在118株葡萄球菌中，共分離出10種，其中凝固酶陽(yáng)性者占43.2%，凝固酶陰性者占56.8%；從總體上看，葡萄球菌的耐藥性均比較強，特別是MRSA和MRCNS；不同菌種與疾病發(fā)生種類(lèi)有明顯的相關(guān)關(guān)系。結論　葡萄球菌是造成醫院感染的主要病原菌之一，合理使用抗生素對于有效治療疾病和控制醫院感染的發(fā)生至關(guān)重要。

　　關(guān)鍵詞：醫院感染；葡萄球菌；藥敏試驗

　　醫院感染資料表明葡萄球菌所致醫院感染病例頗多，臨床治療較為棘手^{［1，2］}。為有效控制該菌所致醫院感染的發(fā)生率，并為臨床用藥提供參考，我們將近兩年來(lái)本院發(fā)生醫院感染患者118例的標本中分離出來(lái)的118株葡萄球菌，進(jìn)行了實(shí)驗分析，現將情況報告如下。

　　1　材料與方法

　　1.1　材料

　　1.1.1　菌株來(lái)源　菌株分離于1996年1月～1998年2月我院腫瘤科、內分泌科、外科、婦產(chǎn)科、小兒科等科室各類(lèi)標本。其中呼吸道29株，感染傷口36株，血液4株，泌尿道31株，其他類(lèi)18株，共118株。標準質(zhì)控菌株ATCC25923，由天壇生物檢定所提供。

　　1.1.2　主要試劑　各種生化反應管、培養基及抗生素紙片，分別購自上海醫化所、天壇生物檢定所。

　　1.1.3　抗生素　苯唑西林(苯唑青霉素)等12種抗生素多數為國產(chǎn)，少數為進(jìn)口，均在有效期內。

　　1.2　方法

　　1.2.1　菌種鑒定　按常規方法將標本接種于5%脫纖維羊血培養基，于35℃培養過(guò)夜，挑取可疑菌落行革蘭染色，確定為革蘭陽(yáng)性球菌，進(jìn)行玻片法血漿凝固酶試驗，經(jīng)純化培養后，菌株保存于瓊脂斜面中。用前傳代培養，按照Kloos等方法鑒定^［3］。主要生理生化試驗：發(fā)酵葡萄糖、試管法血漿凝固酶、DNA酶、硝酸鹽還原、精氨酸雙水解酶、鳥(niǎo)氨酸脫羧酶、β-半乳糖苷酶、尿素、蕈糖、甘露糖、甘露醇及新生霉素抗性。

　　1.2.2　MRS檢測　采用3種方法對118株葡萄球菌進(jìn)行MRS檢測^［4～6］。K-B法，苯唑西林耐藥葡萄球菌試驗，判斷標準按最新規則及標準進(jìn)行，取苯唑西林75／μg紙片在4%NaCl m-H瓊脂平皿上進(jìn)行，經(jīng)24 h培養觀(guān)察并記錄結果，抑菌環(huán)直徑≤10 mm為MRS；瓊脂稀釋MIC法；瓊脂篩選法，6 μg／ml苯唑西林，4%NaCl m-H瓊脂，按NCCLS標準。

　　1.2.3　β-內酰胺酶試驗　采用酸測定法對上述葡萄球菌進(jìn)行快速β-內酰胺酶測定。以大腸埃希菌ATCC35218、金葡菌ATCC25923為質(zhì)控菌。

　　1.2.4　藥物敏感試驗瓊脂稀釋MIC法　分別對青霉素G等11種抗生素MIC測定，均按美國臨床實(shí)驗室標準委員會(huì )制定的最新規則及標準進(jìn)行。

　　1.2.5　資料　分析與分離菌相關(guān)的病歷資料。

　　2　結　果

　　2.1　細菌鑒定結果　經(jīng)詳細的生理生化試驗，分離出金黃色葡萄球菌23株，占19.5%，中間型葡萄球菌28株，占23.7%，表皮葡萄球菌19株，占16%，溶血葡萄球菌15株，占12.7%，里昂葡萄球菌9株，占7.6%，人葡萄球菌7株，占5.9%，耳葡萄球菌7株，占5.9%，華納葡萄球菌3株，占2.6%，其余為腐生和柯氏葡萄球菌7株，占5.9%，共10種。

　　2.2　MRS檢測結果　3種表型方法檢測葡萄球菌對苯唑青霉素耐藥性測定結果見(jiàn)表1，從結果可看出瓊脂篩選出MRS檢出率要高于其他2種，MRSA23株，MRCNS 34株，合計占48.3%。

　　2.3　β-內酰胺酶檢測結果　118株葡萄球菌β-內酰胺酶產(chǎn)生率為51.1%，其中凝固酶陽(yáng)性的葡萄球菌產(chǎn)酶率高，為72.6%。具體分布情況：MRSA17株，MSSA 20株，MRCNS 13株，MSCNS 11株。

　　2.4　藥敏檢測及耐藥率觀(guān)察　按瓊脂篩選法將118株葡萄球菌分成MRSA，MSSA，MRCNS，MSCNS采用瓊脂稀釋法分別測定了它們對青霉素等11種抗生素的MIC(表2)。

表1　3種方法MRS結果比較

表2　118株葡萄球菌對11種抗生素最小抑菌濃度及耐藥率(%)

　　2.5　病歷資料收集　根據標本來(lái)源，共收集118份完整的住院患者資料，其中外科39份，腫瘤科28份，糖尿病患者24份，婦產(chǎn)科12份，小兒科15份。外科病歷系傷口、手術(shù)創(chuàng )面或引流感染，腫瘤患者大多為繼發(fā)呼吸道或插入性感染，糖尿病患者多為繼發(fā)泌尿系感染，婦產(chǎn)、小兒科多為化膿性或肺部感染。分析以上病歷可看出MRS的分離率與患者住院時(shí)間及抗生素使用成正相關(guān)。

　　3　討　論

　　3.1　葡萄球菌是醫院感染的主要病原菌之一　我室分離的118株葡萄球菌均來(lái)自醫院感染患者。其發(fā)生率約占我院醫院感染患者的五分之一到四分之一。有資料表明，血漿凝固酶陽(yáng)性的葡萄球菌(SA)，特別是其中耐苯唑西林(MRSA)者，與醫院感染關(guān)系極為密切。MRSA在歐美造成頑固性醫院感染，開(kāi)始流行于60年代后期到70年代，耐藥性逐年增加，目前遍及全球。血漿凝固酶陰性葡萄球菌(CNS)屬人體正常菌群，80年代后，隨著(zhù)介入性診療手段的廣泛應用、免疫抑制劑的廣泛使用及腫瘤、糖尿病等復雜的疾病基礎，使其成為重要的機會(huì )致病菌，并出現多重耐藥菌株^{［7，8］}。耐苯唑西林凝固酶陰性葡萄球菌(MRCNS)比例也逐年升高，均成為難以控制的醫院感染菌。因此，做好葡萄球菌的監測與鑒定，對控制醫院感染意義重大。

　　3.2　從菌株的致病性看合理使用抗生素至關(guān)重要　通過(guò)我們收集的118例病歷資料看，金黃色及中間型葡萄球菌主要致傷口和術(shù)后感染；表皮葡萄球菌主要致泌尿系感染；溶血葡萄球菌主要致呼吸道感染；其它葡萄球菌呈均勻分布。這些來(lái)自醫院感染患者的菌株，其耐藥性較強。隨著(zhù)患者住院天數的增加，抵抗力的逐漸降低，病情亦日趨加重，從抗生素的用量不斷加大、品種不斷更新，隨之使分離的菌株耐藥性不斷上升，使不少病例形成了抗生素廣泛大量使用與耐藥菌株的頑強遞增這樣一個(gè)惡性循環(huán)。由此看來(lái)，從對患者的治療之初，就應根據致病菌株的特性，藥敏試驗，合理使用抗生素，切不可有絲毫的隨意性。做好環(huán)境條件和各項操作的嚴格消毒亦很重要。

　　3.3　通過(guò)藥敏試驗和β-內酰胺酶檢測為臨床用藥提供參考　本試驗表明，MRSA(MRCNS)的耐藥性明顯高于MSSA(MSCNS)，表現為多重耐藥，除對萬(wàn)古霉素完全敏感、對阿米卡星(丁胺卡那霉素)較敏感外，對其余抗生素均不理想，所以對其治療抗生素選擇范圍相當狹窄。細菌學(xué)檢測中，嚴格區分MRSA(MRCNS)與MSSA(MSCNS)對于指導臨床用藥，是非常必要的。

　　從MRSA與MSSA的產(chǎn)β-內酰胺酶的檢測中，產(chǎn)酶率分別為73.9%和71.4%，二者相比無(wú)明顯差異；同樣，MRCNS與MSCNS的產(chǎn)酶率分別為38.2%和33.3%，亦無(wú)明顯差異，說(shuō)明β-內酰胺酶的產(chǎn)生與耐苯唑西林無(wú)關(guān)。對產(chǎn)酶的葡萄球菌給予酶抑制劑效果較好。

　　3.4　MRS方法學(xué)問(wèn)題　通過(guò)K-B、瓊脂稀釋MIC法、瓊脂篩選法3種方法結果比較看，瓊脂篩選法的檢出率高于其它兩種方法，與國內報道相符。此種方法是目前國內公認的檢測MRS的簡(jiǎn)便、快速、有效的一種方法。

　　曹月升（河北省人民醫院，河北 石家莊 050051)

　　任玉璽（河北省人民醫院， 河北 石家莊 050051)

　　張立志（河北省人民醫院， 河北 石家莊 050051)

　　孫笑菊（河北省人民醫院， 河北 石家莊 050051)

劉朱梅（河北省人民醫院， 河北 石家莊 050051）

《中華醫學(xué)感染學(xué)雜志》

　　參考文獻

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