三種檢測方法對結核病診斷價(jià)值的比較研究

【摘要】  目的：比較涂片法、實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(FQPCR)法、血清學(xué)方法檢測血清結核抗體,對結核病臨床診斷的應用價(jià)值。方法：用涂片法和FQPCR法對1 714份呼吸道和體液標本同步檢測，同時(shí)檢測1 714份血清標本的結核抗體。結果：1 714份送檢標本中，總陽(yáng)性率涂片法為16.3%，FQPCR法為31.6%，血清結核抗體為43.3%；三種方法的靈敏度、特異度分別為:涂片法34.4%和100%,FQPCR法66.4%和100%,血清結核抗體80.7%和90.5%。結論：FQPCR法對結核病尤其是肺外結核的診斷具有較高應用價(jià)值；血清學(xué)方法檢測血清結核抗體可作為菌陰、兒童、無(wú)痰患者及肺外結核診斷的一項重要參考指標；涂片法直觀(guān)、簡(jiǎn)便、價(jià)廉,仍將是結核病實(shí)驗診斷的重要手段。

 

【關(guān)鍵詞】  結核；涂片法；實(shí)時(shí)熒光定量PCR；血清結核抗體

 

    近年來(lái)，隨著(zhù)全球人口流動(dòng)性的增加，艾滋病的流行以及耐藥結核菌株的出現，結核病的發(fā)病率不斷增加，已成為嚴重威脅人類(lèi)生命健康的傳染性疾病，受到世界各國的廣泛關(guān)注。而我國又是全球結核病高負擔的國家之一，據2004年WHO估計，我國每年新發(fā)結核病例占全球每年新發(fā)病例的15%，感染人數居全球第二［1］。而結核病的早期診斷和有效治療是控制結核病疫情的關(guān)鍵。因此，準確、快捷、簡(jiǎn)便的實(shí)驗室檢測方法對于結核病的早期診斷和及時(shí)治療具有十分重要的意義。本文應用涂片法、FQPCR法和血清學(xué)方法檢測結核抗體，三種實(shí)驗室方法對結核病臨床診斷的應用價(jià)值進(jìn)行了比較研究，報道如下。

 

　　1  材料和方法

 

　　1.1  對象

 

　　為我院住院和門(mén)診患者，共1 714例。1 714例患者留取一份呼吸道或體液標本，同時(shí)抽取1份血液標本。送檢的1 714份呼吸道和體液標本中，痰液標本1 170份，支氣管灌洗液355份，胸腔積液83份，腦脊液52份，尿液32份，膿性分泌物8份，淋巴穿刺液9份，關(guān)節液4份，血液標本1 714份。1 714例患者中，臨床確診為結核病者815例，其中涂陰535例，涂陽(yáng)280例；非結核病患者899例，包括慢性阻塞性肺氣腫、肺癌、肺炎及其他炎癥。

 

　　1.2  儀器與試劑

 

　　FQPCR儀器為瑞士RocheLigtcyer基因擴增儀，TBPCR熒光定量檢測試劑盒由中山大學(xué)達安基因股份有限公司提供。血清結核分枝桿菌抗體診斷試劑（TBDOT）為上海奧普生物醫藥有限公司生產(chǎn)。

 

　　1.3  檢測方法

 

　　對臨床送檢的1 714份呼吸道和體液合格標本，同一標本同時(shí)進(jìn)行涂片法和FQPCR法檢測，并同時(shí)對1 714份血液標本進(jìn)行血清結核抗體檢測。涂片法按照有關(guān)的實(shí)驗操作規程進(jìn)行［2］，FQPCR法和血清結核抗體檢測按照試劑盒說(shuō)明操作。

 

　　2  結果

 

　　2.1  涂片法和FQPCR法對1 714份呼吸道和體液標本的檢測結果

 

　　見(jiàn)表1�？傟�(yáng)性率涂片法為16.3%，FQPCR法為31.6%,1 714份血清標本結核抗體陽(yáng)性743份,陽(yáng)性率43.3%。

表1  涂片法和FQPCR法對1 714份標本的檢測結果例(略)

 

　　2.2  確診病例的檢測結果

 

　　見(jiàn)表2。臨床確診為結核病的815例病例中，涂片法陽(yáng)性率為34.4%，FQPCR法陽(yáng)性率為66.4%，血清結核抗體陽(yáng)性率為80.7%。表2  確診病例的檢測結果例(略)

 

　　2.3  三種檢測方法的比較

 

　　見(jiàn)表3。由此可見(jiàn)，三種檢測方法的靈敏度，特異度分別為：涂片法34.4%和100%，FQPCR法66.4和100%。血清結核抗體80.7%和90.5%。表3  三種檢測方法的比較(略)

 

　　3  討論

 

    長(cháng)期以來(lái)，結核病的實(shí)驗室診斷主要依賴(lài)細菌學(xué)涂片和培養檢查［3］。痰涂片檢查不僅可以明確結核傳染源,而且十分經(jīng)濟,符合我國國情,具有簡(jiǎn)便、快捷、低廉的優(yōu)點(diǎn)，但其敏感性低。本文1 714份各類(lèi)標本陽(yáng)性率僅為16.3%，特別是體液標本，陽(yáng)性率僅4.8%（9/189）。

 

    近年來(lái),隨著(zhù)分子生物學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展,PCR技術(shù)已被廣泛用于結核病的實(shí)驗室診斷［4～6］。本文應用FQPCR熒光定量法,避免了PCR定性技術(shù)特異性差,存在假陽(yáng)性和假陰性等問(wèn)題。該方法是利用一對結核分枝桿菌特異性引物和一條結核分枝桿菌特異性熒光探針,配以PCR反應液,耐熱DNA聚合酶(Taq酶),四種核苷酸單體(dNTPS)等成分，用體外擴增法檢測結核分枝桿菌基因。該方法的檢測對象是結核分枝桿菌基因保守片段，動(dòng)態(tài)檢測標本中結核桿菌DNA含量，不受細胞表型和耐藥性影響，具有較高靈敏度和特異性。本文的1 714份呼吸道和體液標本，FQPCR法陽(yáng)性率為31.6%，明顯高于涂片法。尤其是細菌數含量較少的體液標本，FQPCR法的陽(yáng)性率更是達到了37.6%（71/189）。

 

    而血清學(xué)診斷技術(shù)對結核病的檢測近年來(lái)也有較多報道［7，8］。本文檢測方法系采用純化的結核分枝桿菌特異性外膜抗原，利用斑點(diǎn)金免疫金滲濾試驗（DIGFA）原理，用于人血清中結核抗體的檢測。本文1 714份血清標本陽(yáng)性率為43.3%，但由于人群中感染結核分枝桿菌十分普遍，廣泛的卡介苗接種等原因，以及結核病患者個(gè)體的免疫功能影響等因素，使血清結核抗體測定存在一定的假陽(yáng)性和假陰性。本文確診的815例結核病患者中血清結核抗體為陰性157例，占19.3%，非結核病患者899例中有85例抗體假陽(yáng)性，占9.5%，與文獻相符［8］。

 

    綜上所述，FQPCR法用于結核病診斷，其特異性強，為100%（899/899），靈敏度66.4%（541/815），明顯高于涂片法，且操作簡(jiǎn)便，只需2 h～3 h既可完成，對于結核病尤其是肺外結核的診斷具有較高的應用價(jià)值。血清學(xué)方法檢測結核抗體特異性較高90.5%（814/899），靈敏度80.7%（658/815）,高于FQPCR法和涂片法,且操作簡(jiǎn)便、快速、便于推廣、無(wú)須特殊精密儀器，可作為結核分枝桿菌陰性、兒童、無(wú)痰患者及肺外結核診斷中一項重要參考指標。而涂片法作為結核病最基本的細菌學(xué)檢查方法，它所具有的直觀(guān)、簡(jiǎn)便、價(jià)廉等優(yōu)點(diǎn)，仍將是結核病實(shí)驗室診斷的重要手段。

作者：李曉非，李冬玲，施巧霞，陳育林，吳芳華

作者單位：昆明市第三人民醫院，云南 昆明 650041

【參考文獻】

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　�。�4］張詡,盧建平.四種結核分枝桿菌檢測方法的臨床應用評價(jià)［J］.中國防癆雜志,2006,28(1):1617.

　�。�5］梁曉海,黃平東.實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應法檢測肺結核患者痰標本價(jià)值的對照研究［J］.現代中西醫結合雜志,2006,15(3):287.

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　�。�7］莊玉輝.結核病實(shí)驗室診斷新技術(shù)研究應用中值得重視的問(wèn)題［J］.中華結核和呼吸雜志,1999,22(3):133.

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