動(dòng)態(tài)比濁法定量檢測復方氨基酸注射液中的細菌內毒素

 

　�。保�２  方法與結果

 

　�。保�２．１  實(shí)驗條件：檢測溫度為37℃；檢測波長(cháng)為660�。睿�；最長(cháng)檢測時(shí)間為8400�。�。

 

　�。保�２．２  細菌內毒素限值(L)的確定［１］：按公式Ｌ＝Ｋ／Ｍ，Ｋ為靜脈注射給藥的細菌內毒素閾劑量＝50ＥＵ·ｍｌ－１，Ｍ為病人每千克體重每小時(shí)最大給藥劑量。本文采用家兔熱原劑量M＝10ｍｌ·ｋｇ－１·ｈ－１，則復方氨基酸注射液(3AA)細菌內毒素限值(L)為0.5ＥU·ｍｌ－１。

 

　�。保�２．３  標準曲線(xiàn)制備及可靠性：取細菌內毒素工作品1支加BET水10�。恚�，用封口膜封口，置漩渦混合器上混合15�。恚椋�，進(jìn)行10倍稀釋?zhuān)�然�?倍稀釋?zhuān)�且各步置漩渦混合器上混合30�。�，使其最終內毒素濃度為1.0，0.5，0.25，0.125，0.0625，0.0312，0.0156ＥＵ·ｍｌ－１稀釋系列，各取0.15ｍｌ分別加到預先加有0.15ｍｌ鱟試劑的反應管內，混合均勻，插入濁度儀進(jìn)行檢測。每一濃度平行3管，同時(shí)用BET水做2管陰性對照(NC)，結果見(jiàn)表1。表1  標準曲線(xiàn)的可靠性?xún)榷舅貪舛龋�略�?

 

　�。保�２．４  供試品溶液配制及干擾試驗：①供試品最大有效稀釋倍數(MVD)計算：按公式ＭＶＤ＝Ｌ×Ｃ／λ，Ｌ為復方氨基酸注射液(3AA)的內毒素限值0.5 EU·ｍｌ－１，λ為標準曲線(xiàn)最低濃度0.0156 EU·ｍｌ－１，Ｃ為供試液濃度。當L以EU·ｍｌ－１表示時(shí)，C為10 ml·mL-1得樣品試驗時(shí)最大有效稀釋倍數(MVD)為32倍。②干擾預試驗：將3批復方氨基酸注射液(3AA)用BET水稀釋為2、4、6、8倍溶液，每個(gè)濃度分別取0.15�。恚旒�0.15�。恚祺c試劑作為樣品檢查(Eｔ）；同時(shí)另取5管，進(jìn)行同樣倍數稀釋?zhuān)�并在各濃度溶液中強�?.125 ＥＵ·ｍｌ－１的內毒素作為樣品陽(yáng)性對照液(Es)，分別取上述各液0.15�。韑加入預先加有0.15�。韑鱟試劑的反應管內進(jìn)行檢測，每個(gè)濃度重復3管，并設陰性對照，分別測定各濃度樣品液及陽(yáng)性樣品的內毒素含量Et和Es，按下式計算回收率(R)。R=(Es－Ｅt)／0.0125×100％，結果見(jiàn)表2。表2  供試品干擾預實(shí)驗樣品批號稀釋倍數Et(略）     

   

　　根據中國藥典2000年版規定，如果內毒素的回收率在50％～200％之間時(shí)，則供試品在該試驗條件下不存在干擾因素。表2結果表明，3批供試品在各倍稀釋時(shí)均無(wú)干擾作用，4倍時(shí)回收率較好，可作為定量檢測的濃度。

 

　�。保�２．5  供試品干擾試驗與家兔法檢查：取5批復方氨基酸注射液用BET水稀釋4倍，并制備樣品陽(yáng)性對照，每個(gè)濃度重復3管，并做陰性對照，放入檢測儀檢測，同時(shí)進(jìn)行家兔法檢查，結果陰性對照陰性，其他數據見(jiàn)表3。表3  干擾試驗樣品批號稀釋倍數Et(略） 

  　　

　　2  討論

 

　　實(shí)驗結果表明，各倍稀釋液對鱟試劑不存在干擾作用，4倍可以得到很好的回收率，且動(dòng)態(tài)濁度法進(jìn)行細菌內毒素定量檢測，使用計算機全過(guò)程監控，樣品反映情況能在顯示屏上直觀(guān)地反映出來(lái)，與傳統的家兔法相比，避免了動(dòng)物個(gè)體差異及人為判斷誤差所造成的假陽(yáng)性或假陰性結果，具有靈敏、簡(jiǎn)便、結果準確等優(yōu)點(diǎn)，其檢測結果與家兔熱原檢查結果一致。因此，用動(dòng)態(tài)濁度法檢測復方氨基酸注射液(3AA)中細菌內毒素含量是可行的。

作者：宋威 賀德勇   《濱州醫學(xué)院學(xué)報》 2006 年 2 月 第 29 卷 第 1 期

 

　　參  考  文  獻

 

 

　�。保�　夏振民．藥品細菌內毒素檢查的限值［Ｊ］．藥物分析雜志，１９９５，１５（３）：５４

　�。玻�　中國藥典．二部［Ｓ］．２０００（附錄）. 204