阻止切片的霉菌染色方法比較

因病理組織切片常規蘇木紫伊紅染色（下簡(jiǎn)稱(chēng)常規染色）尚能辨認霉菌，所以組織切片的霉菌染色體未得到應有的重視�，F將筆者過(guò)去霉菌感染的組織切片，進(jìn)行了6種霉菌染色比較，結果如下。

 

 

　　1 材料與方法

    

　　從過(guò)去霉菌感染或可疑霉菌感染的19例尸檢和5例活檢標本中（主要是念珠菌\曲霉菌及毛霉菌感染，也有個(gè)別的放線(xiàn)菌及隱球菌感染），選出有關(guān)的組織蠟塊，重作厚4μm切片，脫蠟后分別進(jìn)行革蘭染色，PAS染色，Grialey氏醛品紅-PAS法染色（1.2.3），Grocott-Gomori二氏烏洛托品硝酸銀法染色（4.5），Mallory氏纖維蛋白改良法（2）及常規染色。

   

　　PAS染色胳改用0.2%淡綠代替蘇木紫作對比染色。Grialey氏醛品紅-PAS染色法，用1%高碘酸氧化30min代替5%鉻酸氧化。

 

   　 Grocott-Gomori二氏烏托品硝酸銀染色法，亦用1%高碘酸氧化30min代替5%鉻酸氧化，并以0.2%淡綠代替蘇木紫作對比染色。

    

　　2 結果

    

　　革蘭染色切片內，念珠菌為藍色（革蘭陽(yáng)性），曲霉菌和毛霉菌則為紅色（革蘭陰性），但毛霉菌著(zhù)色較淺，結構不清。因系中性紅對比染色，細胞核亦染為紅色，與霉菌孢子鑒別有困難.放線(xiàn)菌及隱球菌均未著(zhù)色。

   

　　PAS法染色，以淡綠作對比染色較蘇木紫為佳，霉菌均顯紅-紫色菌叢中隔及孢子均明顯可見(jiàn)。

     

　　Grialey氏醛品紅-PAS法染色，霉菌絲及孢子均染成程度不同的紅-紫紅色。但背景亦為淺紫色，對比不鮮明，但霉菌著(zhù)色深，鏡下觀(guān)察仍較常規紫色者為優(yōu)。

  　  Grocott-Gomori二氏烏洛托品硝酸銀染色法，霉菌均染成黑色，當染色深淺適當時(shí)，切片中菌絲的壁，孢子的包膜及菌絲中隔均呈深黑色，菌絲內部顯暗褐色，結構清楚，改用淡綠對比染色，較蘇木紫伊紅染色為鮮明，適合觀(guān)察和攝影。

   　 Mallory氏纖維蛋白改良法，霉菌染為藍-深紫色，背景是蘇木紫及伊紅染色，因此近似常規染色，只是霉菌較深。

    　在常規染色中，霉菌的孢子及菌絲一般均染成淺藍色，較細胞核為淺，因為是藍色，有時(shí)孢子難以與細胞核或已破碎的細胞核鑒別，而菌絲也長(cháng)不能和已擠壓成絲狀的細胞核鑒別。所以，常規染色和其他霉菌染色比較，發(fā)現常規染色存在以下問(wèn)題:（1）每張切片中所見(jiàn)到霉菌的數量遠不及其他霉菌染色多;（2）在常規染色中，有3例未找到霉菌的切片，做了霉菌染色即能證實(shí)有霉菌存在，如1例皮膚燒傷的病例，臨床懷疑有霉菌感染，常規染色不能找到霉菌，而霉菌染色證實(shí)有毛霉菌感染。1例患者用了大量的激素及抗生素后死亡，腎臟有一膿腫，內有多核巨細胞，不象化膿性細菌感染。曾疑為霉菌所致，常規染色未能找到霉菌，經(jīng)霉菌染色后，證實(shí)膿腫內有念珠菌。存在另1例致死性中線(xiàn)肉芽腫患者，用了激素等治療后，肺內有念珠菌\曲霉菌及毛霉菌混合感染，死于十二指腸降部穿孔，穿孔部有壞死及炎癥，疑為霉菌所致，但切片曾多處會(huì )診，均因找不到霉菌而不能肯定.這次做霉菌染色，在穿孔邊緣及壞死區有少數念珠菌，肯定是霉菌感染所致的穿孔;（3）常規染色能見(jiàn)到霉菌數量少，且易與其他組織結構混淆，造成分類(lèi)錯誤或遺漏，經(jīng)霉菌染色糾正分類(lèi)錯誤或遺漏的有7例，多數是毛霉菌與念珠菌混淆。有1例肺內常規染色僅見(jiàn)到多數孢子，未見(jiàn)菌絲，當時(shí)不能分類(lèi)，只能診斷酵母菌類(lèi)霉菌感染，經(jīng)霉菌染色后，發(fā)現有菌絲存在，只不過(guò)量少而已，而改正為念珠菌感染。

   

　　1年后，重新觀(guān)察切片時(shí)，常規染色及Grocott-Gomori氏洛托品硝酸銀染色均無(wú)褪色，其他染色均有不同程度的褪色。淡綠對比染色幾乎完全褪色。    

 

作者：談勤明 胡有長(cháng)  中華醫藥雜志 2004年12月 第4卷 第12期

作者單位:330006江西醫學(xué)院形態(tài)中心教研室