用細菌內毒素檢查測定注射用對氨基水楊酸鈉的熱原

 注射用對氨基水楊酸鈉為抗結核藥�，F有標準［1］采用家兔法進(jìn)行熱原檢查，本文采用細菌內毒素檢查法，通過(guò)干擾實(shí)驗，建立了其細菌內毒素限量檢查的方法�，F報道如下。

 

    1  材料

 

    鱟試劑（TAL，福州東方鱟試劑廠(chǎng)，批號：011225，規格：λ=0.5Eu/ml并經(jīng)復核符合規定）；細菌內毒素工作標準品（福州東方鱟試劑廠(chǎng)，批號：011225）；注射用對氨基水楊酸鈉（哈爾濱制藥總廠(chǎng)，批號：B020401，BO20601，BO20926，規格：2g,經(jīng)熱原測定均符合規定）。電熱恒溫水浴箱：上海醫療器械五廠(chǎng)。旋渦混合器：上海亞榮生化儀器廠(chǎng)。

 

    2  方法與結果

 

    2.1  細菌內毒素限值（L）的計算［2，3］  藥典的熱原檢查（RT）方法是：取本品，加滅菌注射用水制成20mg/ml的溶液，劑量按家兔體重每1kg注射10ml，即劑量為200mg/kg，人體靜脈注射致熱閾值（K）=5.0Eu/kg，則L=K/M=0.025Eu/mg［2］。

 

    2.2  最大有效稀釋倍數的確定  將本品用BET水稀釋成20mg/ml的溶液，其細菌內毒素不得超過(guò)0.025×20=0.5Eu/ml，則應用靈敏度（λ）0.5、0.25、0.125、0.06的鱟試劑，選擇的稀釋倍數分別為：1倍、2倍、4倍、8倍。

 

    2.3  干擾實(shí)驗的預實(shí)驗  取一批RT檢查合格的供試品，用BET水將其配成20mg/ml的溶液，再做2倍、4倍、8倍稀釋。用原液及稀釋液來(lái)溶解并稀釋細菌內毒素工作標準品，使內毒素含量均為1.0Eu/ml，與鱟試劑反應（λ=0.5Eu/ml），并做陰性對照，每一濃度做2管，結果本品對細菌內毒素檢查未見(jiàn)抑制作用。

 

    2.4  干擾實(shí)驗  取3批RT檢查合格的供試品，用BET水配制成20mg/ml的溶液，用此溶液和BET水將細菌內毒素工作標準品稀釋成1.0、0.5、0.25、0.125Eu/ml的溶液，與鱟試劑反應（λ=0.5Eu/ml），每個(gè)濃度做4管，結果見(jiàn)表1。從表1的結果看，鱟試劑在ET水和3個(gè)批號供試品中的λ值為0.25～0.5Eu/ml，均在0.5～2.0λ范圍內，符合中國藥典對細菌內毒素檢查有效性的規定。

 

    2.5  細菌內毒素檢查實(shí)驗  根據干擾實(shí)驗的結果，選用λ為0.5Eu/ml的鱟試劑進(jìn)行實(shí)驗。取3批RT檢查合格的供試品，用BET水配制成20mg/ml的溶液依細菌內毒素檢查法［1］檢查，結果見(jiàn)表2。從表2的結果看，供試品和陰性對照管均呈陰性，供試品陽(yáng)性管和陽(yáng)性對照管均呈陽(yáng)性，實(shí)驗結果成立，3個(gè)批號供試品的細菌內毒素均符合規定，與RT法結果一致。

 

    表1  注射用對氨基水楊酸鈉干擾試驗結果（略）

    表2  注射對氨基水楊酸鈉的細菌內毒素檢查結果（略）

    3  小結

 

    實(shí)驗結果表明，本品對鱟試劑的凝集反應無(wú)干擾作用，用細菌內毒素檢查法來(lái)代替家兔法對注射用對氨基水楊酸鈉進(jìn)行質(zhì)量控制是可行的，方法是將樣品用BET水配制成20mg/ml的溶液，與靈敏度為0.5Eu/ml或靈敏度更高的鱟試劑反應，結果穩定、可靠。

 

作者：朱萬(wàn)政 張美麗  中華醫藥雜志 2004年3月 第4卷 第3期

 

    參考文獻

    1  中國藥典.二部.2000版，附錄.

    2  夏振民.藥品細菌內毒素檢查的實(shí)驗設計.藥物分析雜志，1995，15（30）：54.

    3  黃清泉，夏振民.藥品的細菌內毒素檢查的實(shí)驗設計.中國藥學(xué)雜志，1997，32（2）：72.