應用全自動(dòng)微生物分析系統對ESBLs菌株的檢測及分析

ESBLs是一類(lèi)能裂解大多數青霉素`頭孢菌素和氨曲南的β-內酰胺酶，很容易引起醫院的爆發(fā)流行，多數由大腸埃希氏菌和肺炎克雷白氏菌產(chǎn)生，ESBLs陽(yáng)性菌株常多重耐藥，因此，實(shí)驗室檢測ESBLs細菌至關(guān)重要，利用Vitek分析系統的藥敏卡GNS-NT可檢測出ESBL菌株，且同時(shí)可得到十種藥敏結果。

 

一　材料

1 標本 收集我院自1999-2000年從臨床分離的大腸埃希氏菌81珠和肺炎克雷白氏菌124株，所有菌株均用法國Vitek的GNI試卡鑒定確認（鑒定率在95%以上）。

2 質(zhì)控菌株 大腸埃希氏菌ATCC25922，肺炎克雷白氏菌ATCC700603。

3 主要試劑 篩選及確證實(shí)驗用的M-H瓊脂及藥敏紙片均購自梅里埃公司。

二　方法

1 上機檢測：將以上菌株嚴格參照GNS-NT藥敏卡說(shuō)明書(shū)操作，上Vitek全自動(dòng)分析系統。儀器檢測ESBLs的4個(gè)檢測孔（頭孢噻肟與頭孢噻肟+棒酸，頭孢他啶與頭孢他啶+棒酸）的生長(cháng)濁度變化。當不加棒酸孔的濁度>50%時(shí),判定為ESBL陽(yáng)性。同時(shí)加F5卡以觀(guān)察更多藥物的敏感情況。

2 篩選試驗：將收集的菌株做紙片法藥敏試驗，按NCCLS推薦的紙片法篩選ESBLs的標準進(jìn)行篩選。

3 確證試驗：將可疑菌株用頭孢他啶`頭孢他啶+棒酸及頭孢噻肟`頭孢噻肟+棒酸紙片做藥敏試驗，含棒酸的和不含棒酸的紙片抑菌圈直徑相差大于5mm可判定為陽(yáng)性�！　　　�

 

三 結果

1 上機檢測：124株肺炎克雷白氏菌檢出ESBLs陽(yáng)性菌32株，占待檢菌26%，81株大腸埃希氏菌檢出 ESBLs陽(yáng)性10株，占待檢菌12%。

2 篩選試驗；篩選出可疑菌株78株，其中大腸埃希氏菌25株，肺炎克雷白氏菌53株。（質(zhì)控均在合格范圍內）。

3 確證試驗：篩選出的78株可疑菌株，經(jīng)確證43株為產(chǎn)ESBLs株，其中33株為肺炎克雷白氏菌，10株為大腸埃希氏菌。

四 結果分析

1 上機的ESBLs陽(yáng)性菌42株做確診試驗后都為陽(yáng)性，特異性為100%，有一株確證試驗為ESBLs陽(yáng)性細菌，上機時(shí)是陰性，且確證試驗中此菌株含棒酸和不含棒酸間的抑菌圈直徑相差剛剛達到5mm。這樣Vitek分析系統的GNS-NT卡基本上可以檢測出所有的ESBLs菌株，其靈敏性為97.7%。

2 GNS-NT卡除可以檢測ESBL外，同時(shí)還能得到10種抗生素的藥敏結果，再加上F5卡，增加了可選藥物，以便及時(shí)為臨床提供敏感抗生素。在全自動(dòng)分析系統中藥敏結果有專(zhuān)家系統提示并修正，一旦細菌被檢出是ESBLs陽(yáng)性菌株，如果對青霉素`一`二`三代頭孢菌素和安曲南中任何一種顯示敏感，則系統自動(dòng)發(fā)出“三級專(zhuān)家系統”警報，提示這些藥物對ESBLs菌株活性下降。經(jīng)統計ESBLs陽(yáng)性菌對亞按配能的敏感率為96.7%，對阿米卡星敏感率為14%，對呋喃坦啶敏感率為12%對其他藥物敏感率極低。

五 討論 

    用Vitek32全自動(dòng)分析系統及其藥敏卡可以檢測絕大多數的ESBLs菌株，其敏感性高，特異性好，方法簡(jiǎn)便，結果準確，在測出ESBLs的同時(shí)還可以得到多種抗生素的藥敏結果，為臨床用藥提供可靠依據�？傊�，一旦檢出ESBLs，就應該立即按《中華醫學(xué)檢驗雜志》推薦的治療標準用藥：（1）碳請霉烯類(lèi)抗生素：如亞胺配能，（2）氨基糖苷類(lèi)抗生素：如阿米卡星，（3）頭霉烯類(lèi)抗生素：如頭孢西丁，（4）β-內酰酶抑制劑。首選亞按配能，可采用（2）+（3）或（2）+（4）的聯(lián)合用藥。

   經(jīng)上機檢測到的42株產(chǎn)ESBLs細菌在醫院的分布較局限，腦外科分離到33株，占總數（42株）的87.9%，占全年從腦外科分離到的細菌（52株）的63%，且多數僅對亞按配能敏感，可見(jiàn)其感染已很?chē)乐�，這表明，ESBLs菌株的耐藥性不僅誘導產(chǎn)生，而且還有“傳染性”，可以從一個(gè)產(chǎn)酶耐藥株轉移到另一個(gè)敏感菌株上使其也耐藥。其余的ESBLs菌株在呼吸內科分離到9株，其他病房均未檢出ESBLs，分布較局限說(shuō)明此菌還沒(méi)有在全院范圍內傳播。

 

參考文獻

1 倪語(yǔ)星, 質(zhì)粒介導的超廣譜β-內酰胺酶的耐藥性問(wèn)題及檢測[J].．中華醫學(xué)檢驗雜志1999,22增刊:19-20．

2徐英春， 三種方法檢測超廣譜β-內酰胺酶敏感性比較[J]. 中華醫學(xué)檢驗雜志1999,22:355-357．

3.Sirot D. Extended-spectrum plasmid-mediated betalactamases[J].J Antimicro Chemother1995,