細菌鑒定儀出現“不能鑒定細菌”的處理

我們對現今應用較為普遍的VITEK-AMS鑒定系統中報告“不能鑒定細菌”(UIO)菌株作了進(jìn)一步分析，探討其發(fā)生原因、處理方法，以期建立一套切實(shí)可行的 儀器與手工方法相結合的 細菌鑒定方法。

 

　　一、材料與方法

 

　　1.儀器與試劑：VITEK-AMS 60型全自動(dòng)細菌鑒定儀及其配套GNI、GPI、YBC試驗卡（生物梅里埃公司產(chǎn)品)。

 

　　2.試驗菌株：1 025株本院1999.10.21-2000.3.3臨床標本分離的菌株進(jìn)行了Vitek- AMS鑒定，其中應用GNI 卡631例、GPI卡334例、YBC卡60例。

 

　　3.VITEK-AMS鑒定法：根據細菌表型特征，選擇相應GNI+、GPI、YBC卡，嚴格按儀器操作說(shuō)明進(jìn)行，孵育后當儀器報告結果為UIO時(shí)，挑取生長(cháng)對照孔(GPI卡第1孔、GNI+卡第3孔、YBC卡第24孔)懸液于非選擇性培養基上重新分離，觀(guān)察是否純培養，若是，分別按同法及以下兩法鑒定。否則，經(jīng)純培養后重新上機鑒定。

 

　　4.雙歧檢索鑒定法：根據Vitek全自動(dòng)微生物分析系統技術(shù)資料提供的雙歧檢索表，依生化結果檢索至屬或種。

 

　　5.常規鑒定法：按照全國臨床檢驗操作規程［1］進(jìn)行，并經(jīng)API系統(生物梅里埃公司) 復核鑒定至種。部分菌株鑒定依據文獻［2］進(jìn)行。

 

　　二、 結果

 

　　1.UIO 發(fā)生機率：總共1025株細菌鑒定中，共出現 UIO 44株，占4.3%。其中GPI卡334株，出現UIO16株，占4.8%；GNI+卡631株，出現UIO 24株，占3.8%；YBC卡60株，出現UIO4株，占6.7%。

 

　　2.UIO發(fā)生原因：在44株出現UIO中，9株（0.9%)為待檢細菌不純，3株(0.3%)為濁度不合要求，2 株(0.2%)為接種物孵育時(shí)間過(guò)長(cháng)（超過(guò)48 h）， 2株(0.2%)為超出試驗卡鑒定范圍（均為臭鼻克雷伯菌），1株(0.1%)為菌懸液不乳化（粘液型綠膿假單胞），其他如沖液時(shí)氣泡過(guò)多，或其他原因不確定者27株（2.6%）。

 

　　3.處理：（1）9株不純菌株，經(jīng)純培養后，重新上機，均能成功鑒定。（2）35株純培養但報告UIO菌株中，18株(1.8%)可通過(guò)雙歧檢索法獲得結果，并與常規分類(lèi)法結果完 全一致。3 株（0.3%）濁度不合要求者經(jīng)調整濁度后重新上機獲得結果。 2株(0.2%)接種物超過(guò)48 h菌株，經(jīng)重新孵育后得以鑒定。1株(0.1%)為懸液不乳化菌株經(jīng)配制3個(gè)麥氏單位菌懸液，然后低速離心1～2 min(1 000 r/min)，取上清液比濁并調節到所需的濃度后，得以鑒定。(3)余下11株(1.1%)菌中，僅2株(1株為大腸埃希菌，另1株為臭鼻克雷伯菌)不能從雙歧檢索表中查出 結果，其他9株(主要為洋蔥假單胞菌、瓊氏不動(dòng)桿菌、木糖產(chǎn)堿氧化桿菌等)，雖能從雙歧檢索表獲得結果，但與常規鑒定法結果不相符合，或出現矛盾的生化結果，需增加試驗項目，按常規鑒定方法及 API系統報告結果。

 

　　三、討論

 

　　實(shí)驗表明95.7%的臨床分離菌株可通過(guò)VITEK-AMS正確鑒定，僅4.3%菌株無(wú)法一次性成功鑒定。細菌不純是產(chǎn)生這部分菌株的主要原因（占近1/5），其他如待檢菌菌齡、菌液濃度也是關(guān)系鑒定成敗的關(guān)鍵。由于儀器本身原因（如對于罕見(jiàn)生物型、新種或不典型菌株無(wú)法鑒定）也不可忽視。正確處理這部分菌株，有重要的臨床意義。實(shí)際應用自動(dòng)化儀器時(shí)，必須挑取純培養菌落，可提高鑒定率，對確認為純培養而無(wú)法鑒定者，可通過(guò)傳統分類(lèi)法，參照雙歧檢索表能成功鑒定將近一半菌株，因此合理應用雙歧檢索表不失為一種較好的輔助方法。但仍有占總數1.1%菌株需用常規方法或其他方法如API系統重新鑒定。

作者：鐘步云　孔海深　徐林燕　林林  中華醫學(xué)檢驗雜志 2000年第6期第23卷

　　參考文獻

 

　　1，葉應嫵，王毓三，主編. 全國臨床檢驗操作規程. 第2版. 南京： 東南大學(xué)出版社,1997.5.

2，Patrick R. Manual of clinical Microbiology (7th Edition). Washington DC: American Society for Microbiology, 1999.316-647.