影響微生物檢驗質(zhì)量的因素分析

 為了保證微生物檢驗結果的準確性和可靠性，微生物實(shí)驗室必須建立質(zhì)量控制體系，充分考慮到影響檢驗結果的因素并加以控制，可提高微生物檢驗工作的質(zhì)量。

 

 

    1  實(shí)驗室設施和環(huán)境條件的要求

 

 

    由于受經(jīng)濟和技術(shù)條件限制，目前不少微生物實(shí)驗室仍將實(shí)驗用房簡(jiǎn)易分隔成操作間和緩沖間，操作間又分隔成許多小隔離區，如霉菌區等，并靠安裝幾支紫外線(xiàn)消毒燈，以達到隔離與消毒的目的。這種實(shí)驗室格局在一部分醫療單位還在使用，并以菌落數等一些技術(shù)參數為控制指標，這些顯然已跟不上醫學(xué)發(fā)展的要求。較完善的微生物實(shí)驗室一般應具備無(wú)菌實(shí)驗室、凈化實(shí)驗室、生物安全實(shí)驗室等，凈化實(shí)驗室應采用封閉過(guò)濾除菌，通風(fēng)方式、吊頂、隔墻、圍護全部采用彩鋼板，地面作環(huán)氧樹(shù)脂自流平處理，并設置非凈化區、更衣區、凈化區。凈化實(shí)驗室應定期進(jìn)行風(fēng)速監測和及時(shí)更換過(guò)濾層罩，條件有限的實(shí)驗室可使用超凈工作臺；無(wú)菌室應配紫外線(xiàn)消毒裝置，在使用前后都應用紫外線(xiàn)燈照射消毒，并定期進(jìn)行紫外線(xiàn)強度和空氣質(zhì)量監測；生物安全實(shí)驗室除了正常管理、維護之外，要注意空氣過(guò)濾的質(zhì)量和工作人員的隔離防護。

 

 

    2  實(shí)驗操作人員的作用

 

 

    微生物實(shí)驗室的質(zhì)量可以通過(guò)正確的操作來(lái)體現，例如，革蘭氏染色，可以通過(guò)對標準質(zhì)控菌株的染色來(lái)反映操作和試劑的質(zhì)量，這是有形的、看得見(jiàn)的，然而，質(zhì)量保證更依賴(lài)工作人員的認知能力。一個(gè)受過(guò)充分培訓的、能夠嚴謹地分析實(shí)驗結果的工作人員，不是只能忠實(shí)地記錄實(shí)驗數據，而是可以實(shí)施更加嚴格的標準。在微生物檢驗中會(huì )遇到一些不常見(jiàn)結果或一些散在地發(fā)生的錯誤，例如，試驗中發(fā)現的少見(jiàn)菌、從未見(jiàn)過(guò)的藥敏表型、污染率的增加等，往往通過(guò)一些質(zhì)控方法難以檢查出來(lái)，但具有質(zhì)量意識的微生物技術(shù)人員能對這些現象質(zhì)疑，及時(shí)糾正，保證結果的準確可靠。

 

 

    3  采樣及培養基和試劑的購置

 

 

    有質(zhì)量保證的樣品是獲得正確檢驗結果的基礎。雖然樣品種類(lèi)繁多，但不同品種的樣品都要按照國家規定的標準方法進(jìn)行采樣，每個(gè)樣品要登記并注明名稱(chēng)、數量、批號、采樣日期等。不同的樣品要采用不同的運輸和保存方法，防止樣品在運輸和保存過(guò)程中微生物數量的改變。微生物實(shí)驗室可根據各自情況參照國際食品規格委員會(huì )（ICMSF）推薦的食品采樣方法和標準建立可靠的質(zhì)量評價(jià)方法以保證樣品合格［1］。購置培養基和試劑時(shí)要求供應商提供產(chǎn)品質(zhì)控證書(shū)，盡量選擇通過(guò)ISO9001的生產(chǎn)廠(chǎng)家購買(mǎi)。培養基和試劑使用前首先通過(guò)外觀(guān)、批號、pH值、滅菌要求、選擇性等進(jìn)行初步評估，還要用陽(yáng)性對照菌株做質(zhì)控，按照培養基和試劑標簽說(shuō)明的貯藏條件保存，不同批號的培養基和試劑不要混合使用。自配的染液每周必做質(zhì)控。如果有條件可參照國際食品微生物與食品衛生委員會(huì )（ICFMH）提供的關(guān)于培養基質(zhì)控方法進(jìn)行質(zhì)控。

 

 

    4  樣品處理與培養

 

 

    按照檢驗目的不同的樣品要采用不同的處理方法。對于固態(tài)樣品用均質(zhì)器以無(wú)菌操作方法處理樣品，可調節均質(zhì)器均質(zhì)時(shí)間處理不同種類(lèi)的樣品。均質(zhì)器、培養箱、冰箱等儀器設備要通過(guò)計量認證。微生物培養時(shí)要準確記錄溫度、氣體濃度等參數，使其嚴格符合檢驗程序要求。定期對實(shí)驗用儀器設備進(jìn)行正確維護、校準和質(zhì)控［2］。

 

 

    5  菌株保存

 

 

    標準菌株和從樣品中分離出的菌株，其保存方法有多種，最理想的為真空冷凍干燥法，但這種方法的操作技術(shù)難度大，花費高，需特殊設備，一般單位不易做到。而常規瓊脂斜面保存法，常因傳代次數多，易污染，易變異。近幾年來(lái)，采用卵黃液普通安瓿熔封法超低溫保存菌種，效果很好［3］。

 

 

    6  檢驗方法的選擇

 

 

    檢驗方法是微生物實(shí)驗室質(zhì)量保證的重要步驟，它必須統一、準確可靠。檢驗方法優(yōu)先采用國家規定的標準檢驗方法或國際標準、行業(yè)標準、地方標準規定的檢驗方法，無(wú)上述標準時(shí)，經(jīng)協(xié)商也可采用企業(yè)標準。在檢驗過(guò)程中還要注意三點(diǎn)：（1）做平行樣，以保證結果的可比性；（2）設立空白對照，以防止其他污染而導致的結果不準確；（3）設計合適的質(zhì)控頻率，進(jìn)行質(zhì)控試驗。將質(zhì)控菌株與常規工作一起進(jìn)行，不能為質(zhì)控菌株設計單獨操作程序，更不能專(zhuān)人專(zhuān)做。當質(zhì)控標準菌株的內在敏感性發(fā)生改變時(shí)要更換新的菌種。

 

 

    7  確證試驗和實(shí)驗室校準

 

 

    用陰性、陽(yáng)性標準菌株做確證試驗，特別在做微生物生化試驗和免疫試驗時(shí)一定要設立陰性、陽(yáng)性對照組。建立試驗室內部失敗報告、內審制度，記錄整個(gè)實(shí)驗過(guò)程中的錯誤信息；參加室間質(zhì)控評比，不斷提高實(shí)驗技術(shù)水平；及時(shí)更新程序性文件，完善實(shí)驗室質(zhì)量保證體系。

作者：王釘釘  中華醫學(xué)研究雜志 2006年3月 第6卷 第3期

 

 

    【參考文獻】

    1  ICMSF, Sampling for Microbiological Analysis. Toronto, University of Toronto Press, 2nd, 1986.

    2  陳劍剛. B/T15481-2000標準在衛生檢驗質(zhì)量控制中的應用. 中國衛生檢驗雜志,2002,12(4):487.

    3  沈德心,封志純,杜江.一種實(shí)用菌種的保存方法.中國衛生檢驗雜志,2003,13(6):757.