鮑曼不動(dòng)桿菌院內感染株的耐藥及同源性分析

 鮑曼不動(dòng)桿菌(AB)由于其對營(yíng)養無(wú)特殊要求，抵抗力強，在干燥物體表面可存活時(shí)間長(cháng),在住院病人中定植率為75%［１］,所以極易播散并引起院內感染。同時(shí)，由于長(cháng)期抗生素選擇壓力使多重耐藥株明顯增加,特別是對碳青霉烯類(lèi)的耐藥,給臨床抗菌治療帶來(lái)困難。作者對分離的223株鮑曼不動(dòng)桿菌進(jìn)行了抗菌藥物敏感性試驗，并對27株耐碳青霉烯類(lèi)抗生素的菌株進(jìn)行基因分型，結合臨床資料分析感染源頭及途徑，現報告如下。

 

　　1  臨床資料

 

　　1.1  菌株來(lái)源

 

　　223株AB均分離自2006年1至12月本院住院病人，菌株使用ATB細菌鑒定儀（法國B(niǎo)ioMerieux公司）鑒定。標準菌株為大腸埃希菌ATCC25922和銅綠假單胞菌ATCC27853。

 

　　1.2  儀器和試劑

 

　　水解酪蛋白(Mueller-Hinton,MH)瓊脂購自法國梅里埃公司，哌拉西林(PIC)、哌拉西林/他唑巴坦（TZP）、頭孢哌酮/舒巴坦（CPS）、頭孢他啶（CAZ）、頭孢吡肟（FEP）、氨曲南（ATM）、亞胺培南（IPM）、美洛培南（MER）、慶大霉素（GEN）、阿米卡星（AKN）、環(huán)丙沙星（CIP）、復方新諾明（TSU）頭孢噻肟（CTX）等藥敏紙片均為OXOD公司生產(chǎn)， MERCK公司的蛋白酶K，Seakem Gold瓊脂糖，DNA限制性?xún)惹忻窼ma-I為寶生物工程（大連）有限公司產(chǎn)品。

 

　　1.3  藥敏試驗

 

　　采用K-B法測定13種抗菌藥物的敏感性，并根據CLSI/NCCLS 2006年版［２］要求進(jìn)行抗生素敏感性判斷。

 

　　1.4  脈沖場(chǎng)凝膠電泳

 

　　參考《分子細菌學(xué)方法與臨床應用》［3］，切1～3mm膠塊，浸入150μl酶切體系中（其中含Sma-I30IU），37℃酶切過(guò)夜。使用電泳儀（Bio-rad）,電壓6V/cm，電泳時(shí)間16h，脈沖參數0.22～18s，120°，電泳溫度14℃。電泳結束后，將凝膠取出，用0.5μg/ml的Goldview染色30min,去離子水脫色30min，用凝膠成像儀讀膠分析。

 

　　2  結果

 

　　2.1  抗菌藥物敏感性試驗

 

　　見(jiàn)表1。表1  223株鮑曼不動(dòng)桿菌對13種抗菌藥物的藥敏結果（略）

 

　　2.2  PFGE結果

 

　　PFGE 電泳圖(圖1)，聚類(lèi)分析結果(圖2)。聚類(lèi)分析提示27株菌株有7個(gè)克隆，其中3、4、6、9、10、11、12、13、14、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27等19株為同一克�。ˋ1型）。1號和2號株為同一克�。ˋ2型），16號和17號株為同一克�。ˋ3型）， 5、7、8、15各自為不同克隆。

 

　　2.3  臨床資料分析

 

　　27株耐碳青霉烯類(lèi)抗生素的菌株來(lái)自呼吸科3株、神經(jīng)外科7株、重癥監護室17株。標本來(lái)源：來(lái)自血液2株、靜脈導管頭1株，其余均為痰標本。重癥監護室的17株菌株為A1、A2、A3克隆，神經(jīng)外科7株為A1克隆。病人因病情危重均不可避免的長(cháng)時(shí)間住院，同時(shí)又使用人工氣道或各種侵入性操作、免疫抑制劑、廣譜抗生素等。

 

　　3  討論

 

    鮑曼不動(dòng)桿菌系條件致病菌，普遍存在于環(huán)境中，是臨床標本和院感監測中最常分離到的革蘭陰性非發(fā)酵菌。近年來(lái)，鮑曼不動(dòng)桿菌感染率不斷上升，已成為重癥監護室、神經(jīng)外科和呼吸科抗感染治療最棘手的問(wèn)題。本試驗中,223株鮑曼不動(dòng)桿菌對亞胺培南和美洛培南的敏感性最高(87.89%),但已出現耐碳青酶烯類(lèi)抗生素的菌株，由于舒巴坦對鮑曼不動(dòng)桿菌有獨特的抑酶活性,使CPS具有78.48%的敏感性明顯比TZP高。第三、四代頭孢菌素及ATM的耐藥率為58.74%～70.40%,青酶素類(lèi)、氨基糖甙類(lèi)、TSU、CIP的耐藥性均很高。 2002年1至12月全國細菌耐藥性監測網(wǎng)所屬57家三級甲等醫院調查發(fā)現，AB菌臨床分離率為4.2%［４］，并發(fā)現AB菌對17種臨床常用藥物的耐藥率4.3%～86.9%。解放軍總醫院對呼吸機相關(guān)肺炎的病原學(xué)和耐藥性監測發(fā)現，AB菌分離率達11.5%,對15種臨床常見(jiàn)藥物的耐藥性更高達10.5%～100%［５］。

　　

    本PFGE聚類(lèi)分析提示，27株菌株有7個(gè)克隆，其中3、4、6、9、10、11、12、13、14、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27等19株為同一克�。ˋ1型），1號和2號株為同一克�。ˋ2型），16號和17號株為同一克�。ˋ3型）， 5、7、8、15各自為不同克隆。對比臨床資料發(fā)現重癥監護室的17株菌株為A1、A2、A3克隆，神經(jīng)外科7株為A1克隆，這種在同一時(shí)間、空間分布的集中趨勢，認為是大規模的暴發(fā)流行，需聯(lián)合院感管理部門(mén)進(jìn)一步監控。PFGE高重復性的分辨能力，其分型結果是控制院內感染的重要基礎，可以幫助臨床發(fā)現潛在的危險因素，進(jìn)而及時(shí)切斷流行菌株的來(lái)源及傳播途徑。當發(fā)現相似耐藥譜的鮑曼不動(dòng)桿菌的流行，就必需采取嚴格的措施，防止交叉感染。因鮑曼不動(dòng)桿菌耐受肥皂，所以應注意無(wú)菌觀(guān)念，防止造成醫源性感染。嚴格消毒呼吸機管道，定期取樣送檢，同時(shí)應加強抗菌藥物的合理使用和細菌耐藥性的檢測及監測，是防止和延緩鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥率增長(cháng)的必需措施。

作者：應建飛 陳云波 俞燕紅    作者單位：315040 浙江省寧波市鄞州人民醫院 310003 浙江大學(xué)醫學(xué)院附屬第一醫院

 

【參考文獻】

  　　1 張櫻. 不動(dòng)桿菌感染及耐藥機制的研究進(jìn)展. 國外醫學(xué)流行病學(xué)傳染病學(xué)分冊，2005,32(2):109～１12．

　　2 National Committeefor clinical laboratory standard. Perfermance standards for antimicrobial susceptibility testing. Eleventh informational Supplement. M100-S15 Vol 25. Pennsylvania:NCCLS, No.1,January 2006.

　　3 Neil Woodford.Alan P.johnson. 分子細菌學(xué)方法與臨床應用.西安：世界圖書(shū)出版公司，1998.43～47.

　　4 馬越，李景云，張新妹，等.2002年臨床常見(jiàn)細菌耐藥性監測.中華檢驗醫學(xué)雜志，2004，27（1）：38～45.

5 蔡少華，張進(jìn)川，俞森洋，等.呼吸機相關(guān)肺炎的病原學(xué)和耐藥性監測.中華醫院感染學(xué)雜志，2004，14（4）：365～368.